La investigación se realizó
siguiendo los principios éticos para las investigaciones médicas en seres
humanos según la declaración de Helsinki.
Para estudiar el efecto de la
infección con H. pylori y su relación
con niveles de prohepcidina, y estado del hierro en niños con síntomas de
esta infección, antes y después de erradicar la bacteria, se estudiaron niños que acudieron al servicio
de Gastroenterología Pediátrica de la Ciudad Hospitalaria Dr. Enrique Tejera de
la Ciudad de Valencia, Estado Carabobo-Venezuela, debido a anorexia y a molestias
gastroenterológicas severas y recurrentes. Después de un examen clínico, se
estableció que 78 de estos niños, eran potencialmente H. pylori positivo por lo que se citaron para una endoscopia. El
día de la endoscopia los niños se presentaron en ayunas y con el consentimiento
escrito e informado de sus representantes, se procedió a tomar una muestra de
sangre y además se aplicó la técnica del aire espirado para la detección del H pylori. Los
resultados de la biopsia obtenida durante la endoscopia señalaron que de los 78 niños estudiados, sólo 33 mostraron signos de
gastritis crónica activa, severa o moderada asociada con la presencia de H. pylori. A todos ellos se
les indicó tratamiento triple para erradicar la
bacteria H. pylori, (Esomeprazol,
15mg cada 12hr durante 15 días; Amoxicilina, 30 mg/Kg cada 12 horas durante 10
días y Claritromicina, 7,5mg/Kg cada 12
horas durante diez días.) A estos niños se les
citó 60 días después de finalizado el tratamiento para una segunda prueba de
aire espirado y una nueva toma de muestra de sangre. De estos niños, se
seleccionaron 20 que cumplieron con todas las etapas del estudio y en los que el
tratamiento fue exitoso en erradicar la bacteria.
Detección de H. pylori: Para establecer la infección con H. pylori se utilizó el método del aire espirado. Esta metodología
consiste en tomar muestras del aire espirado antes y después de la
administración de una dosis oral de urea marcada con C13. En los
niños infectados la ureasa de la bacteria desdobla la urea en C13O2 y amoníaco, con lo que aumenta la
concentración de C13O2 en el aire espirado. Esto se mide
en un espectrómetro de masa y si la
diferencia entre el valor medido después de la dosis de urea marcada, es 3,5%
mayor que el medido antes de la dosis, se considera H. pylori positivo (25,26). Esto se define como “% Delta
Over Base” o % DOB. Mientras mayor es el
% DOB, mayor es la carga bacteriana y en consecuencia la severidad de la
infección con H. pylori.
Las muestras de aire espirado
fueron enviadas por vía aérea al Laboratorio de Isótopos Estables de la
Universidad de Buenos Aires, Argentina para su procesamiento.
Evaluación del estado del hierro:
Hemoglobina, hematocrito y
leucocitos se determinaron en un Contador Hematológico Midray BC-2600 tal como se
describió anteriormente (21).
La Ferritina sérica se determinó mediante el método de enzimoinmunoanálisis
(ELISA), utilizando un lector de ELISA marca Labsystems. Valores menores
a 15 µg/L se consideraron deficientes.
Los Receptores Solubles de Transferrina (RsTf) en suero se
determinaron usando un método inmunoenzimático con un Kit de la casa R&D.
Se utilizó un lector de ELISA marca
Labsystems. Debido
a la escasa información respecto a los límites de normalidad para los RsTf, en
este estudio se tomó como valor de referencia el recomendado por el fabricante.
Se definió como eritropoyesis deficiente de hierro, a valores superiores a 2,3
mg/L (27 nmol/L).
Para el diagnóstico de
deficiencia de hierro se utilizó el algoritmo (27) que incluye las
concentraciones de Ferritina, de Proteína C Reactiva (PCR), los RsTf y el
contaje de leucocitos tal como se describió previamente (21).
Los niveles séricos de
prohepcidina se determinaron en suero mediante la técnica de Inmunoensayo
enzimático (ELISA), utilizando un Kit de la casa DRG (Kit Hepcidin Pro-hormone
EIA-4644), la absorbancia obtenida se midió en un lector de ELISA. En este
ensayo se consideraron valores medios y
mediana normal a concentraciones de 104,5 y 92,2 ng/ml, respectivamente.
Los niveles séricos de Proteína C
Reactiva (PCR) se determinaron en suero mediante un ensayo nefelométrico
utilizando el Kit MININEPH PCR de la casa Binding Site (Código ZK044.L.R) y un
analizador MININEPH de la misma casa comercial. Se consideraron niveles
moderadamente elevados valores de PCR entre 1-10 mg/L, incrementos que se
asocian a la inflamación crónica (28).
Para el análisis estadístico se
utilizó el programa SPSS versión 17.0. Previo al análisis de los datos se
realizaron las pruebas de Normalidad de Kolmogorov-Smirnov y Shapiro Wilk.
Debido a que las variables no mostraron una distribución normal, el análisis
estadístico se realizó utilizando pruebas No Paramétricas.
Para evaluar la presencia de
asociación entre la infección por H.
pylori y la anemia o deficiencia de hierro se utilizó la prueba exacta de
Fisher. Para comparar grupos se utilizó la prueba de Wilcoxon que se usa para la
comparación de muestras pareadas. El nivel de significancia se fijó en 5% para
todas las pruebas estadísticas.