Abril-Junio 2018 74
ISSN 1317-987X
 
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Anatomía Patológica
Vacuolización neuronal y cambio espongiforme en la corteza cerebelosa de un perro Pastor Alemán joven

Materiales y Métodos

La autopsia fue realizada en la Sección de Neuropatología del Instituto Anatomopatológico “Dr. José A. O´Daly” de la Universidad Central de Venezuela. Múltiples muestras del sistema nervioso central y periférico, órganos internos y músculo esquelético de los miembros fueron fijadas en formol tamponado al 10%, deshidratadas en alcohol e incluidas en parafina. Todas las secciones histológicas fueron teñidas con hematoxilina y eosina. Cortes histológicos seriados de músculo esquelético y tejido nervioso también fueron teñidos con tricrómico de Gomori, crésil violeta, Spielmeyer-Woelcke para mielina y BGD para neurofibrillas y axones. 

Para la detección inmunohistoquímica de PrP del scrapie en el tejido nervioso del perro, se emplearon el anticuerpo monoclonal F99/97.6.1 incluido en el kit Pullman TSE-IHC/99 (VMRD Inc.), el sistema de capilaridad Microprobe y el crómogeno diaminobencidina (DAB) (26).  Un bloque de parafina con tallo encefálico incluido de una oveja con scrapie procedente de Estados Unidos sirvió como fuente de controles positivos. Todas las muestras de tejido nervioso fueron tratadas con ácido fórmico al 95-98% por una hora, seguido de fijación en formol tamponado al 10% por 48 horas y posterior procesamiento de rutina hasta la inclusión en parafina. Cortes histológicos de 4 mm de espesor fueron colocados en portaobjetos con carga eléctrica (Probe On plus), los cuales fueron pareados para capilaridad en un Slide Holder. Las láminas fueron desparafinadas con xilol, rehidratadas y posteriormente incubadas con peróxido de hidrógeno al 3% en metanol durante 10 mínutos. Para la recuperación antigénica, las secciones histológicas fueron incubadas con ácido fórmico al 95% por 5 minutos a temperatura ambiente, seguido de lavado y neutralización con tampón Tris-HCl 0.1M a pH 7.6 y posterior inmersión en solución blanco recuperadora de Dako de pH 6.1 en autoclave a 120°C por 20 minutos. Luego de inmersión en tampón tris salino con Tween 20 (TBST) por 10 minutos, las láminas fueron incubadas con proteinasa K por 30 segundos a temperatura ambiente seguido de 3 enjuagues con TBST por 20 segundos cada uno. Subsecuentemente, se realizó incubación durante 10 minutos con el anticuerpo monoclonal anti-PrP del scrapie en dilución 1:1000 (concentración final de 10 mg/ml), seguido del anticuerpo secundario biotinilado (IgG anti-ratón biotinilado) por 10 minutos y el complejo estreptavidina-biotina-peroxidasa por 10 minutos, con lavados intermedios con TBST 3 veces por 20 segundos cada uno. Se utilizó la DAB como crómogeno por 5 minutos, seguido de lavado con agua destilada y contratinción con hematoxilina de Mayer. Finalmente, las secciones histológicas fueron deshidratadas, pasadas por xilol y cubiertas con laminillas cubreobjetos. 



Continua: Resultados

Vacuolización neuronal y cambio espongiforme en la corteza cerebelosa de un perro Pastor Alemán joven
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Caso Clínico
Materiales y Métodos
Resultados
Discusión
Referencias

NOTA: Toda la información que se brinda en este artículo es de carácter investigativo y con fines académicos y de actualización para estudiantes y profesionales de la salud. En ningún caso es de carácter general ni sustituye el asesoramiento de un médico. Ante cualquier duda que pueda tener sobre su estado de salud, consulte con su médico o especialista.





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