Abril - Junio 2007 31
ISSN 1317-987X
 
Buscar




Artículos
 




Virología
Mecanismos de acción de compuestos antivirales aislados en plantas: el Virus de la Inmunodeficiencia Humana como modelo.

Otros inhibidores de la adsorción: el ácido repandusínico de Phyllanthus niruri.

Existen otros compuestos que actúan al nivel de la adsorción. Tal es el caso del ácido repandusínico (AR) aislado de Phyllantus niruri. Ésta es una hierba medicinal que se ha empleado como diurético y para el tratamiento de la ictericia. En experimentos previos se reportó que el extracto acuoso de la planta presentaba un efecto antiviral al actuar sobre la DNA polimerasa del virus de la hepatitis B y sobre la RNA polimerasa del virus de la mieloblastosis aviar (Ogata et al, 1992). Aunque se ha encontrado que el AR es un inhibidor de la actividad de la RT del VIH-1, como se describirá más adelante, Ogata et al. (1992) observaron que el compuesto también podía operar sinergísticamente con el AZT (un INRT de actividad anti-VIH conocida), probablemente debido a su capacidad para inhibir la adsorción viral. En efecto, al realizar ensayos de viabilidad celular sobre células T infectadas en presencia de AR y sulfato de dextrano (DXS), se observó un antagonismo entre los dos compuestos, indicando que actuaban del mismo modo (Figura 6). Los ensayos de viabilidad celular se basaron en el mismo principio descrito anteriormente para el MTT, pero el sustrato utilizado fue el 2,3-bis(2-metoxi-4-nitro-5-sulfofenil)-2H-tetrazolium-5-carboxanilido (XTT), un compuesto que permite generar un producto cromogénico soluble en presencia de un transferidor de electrones adecuado (Riss y Moravec, 1996).

Figura 6. Efecto inhibitorio de AR en presencia de AZT (a) o DSX (b). [RA]x, [AZT]x y [DXS]x indican las concentraciones de RA, AZT y DXS que causaron un % de inhibición x cuando cada droga se probó por separado. [RA]comb, [AZT]comb y [DXS]comb representan las concentraciones de RA, AZT y DXS que causaron un % de inhibición x cuando se combinaron las drogas. Los puntos por debajo de la diagonal indican sinergismo mientras que los que se sitúan por arriba señalan antagonismo (Ogata et al, 1992).

 

Los inhibidores de la fusión: la baicalina de Scutellaria baicalensis.

La baicalina es un flavonoide aislado de las raíces de Scutellaria baicalensis, una planta empleada en la medicina tradicional China para tratar bronquitis, nefritis, hepatitis, asma y dermatitis (Li, et al, 2000). Los flavonoides son compuestos comunes en plantas y presentan actividades biológicas interesantes como vasodilatadores, anti-inflamatorios, anti-alérgicos y antivirales entre otros (Lin et al, 1999). Son compuestos polifenólicos de 15 carbonos con estructuras sumamente diversas que se organizan alrededor de un núcleo común, constituido por 2 anillos de benceno unidos por una cadena de tres carbonos. Se ha determinado que las propiedades anti-inflamatorias de la baicalina parecen deberse a su capacidad para bloquear la interacción de ciertas quimiocinas con los receptores CCR5 y CXCR4, que también juegan un papel clave en la infección por VIH (Li, et al, 2000). Basado en lo anterior, Li y colaboradores estudiaron el efecto de este compuesto sobre la fusión del VIH con células diana. Para tal fin, emplearon dos líneas celulares: una co-expresaba el receptor CD4 y el co-receptor CCR5 (R5) y la otra el receptor CD4 y el co-receptor CXCR4 (X4). Ambas fueron además infectadas con un vaccinia virus recombinante que llevaba el gen que codifica para la RNA polimerasa del bacteriófago T7, el cual se encontraba bajo el control de un promotor del vaccinia virus que se expresa constitutivamente (Hruby, 1990). Paralelamente, se coinfectaron células Hela con dos vaccinia virus recombinantes: uno de ellos contenía el gen env de cepas M-trópicas y el otro contenía el gen reportero lacZ unido al promotor de la RNA polimerasa T7. Por otro lado, introdujeron un vaccinia virus con el gen reportero antes mencionado a una línea celular que ya poseía el gen env con tropismo hacia células T. De esta manera se logró generar un sistema de células capaces de fusionarse entre sí y de recrear el proceso de entrada del VIH-1, pudiendo monitorear y cuantificar la fusión celular gracias a la actividad de la enzima β-galactosidasa, que sólo podía expresarse a partir del promotor de la RNA polimerasa de T7 tras ocurrir la fusión.
 

Figura 7. Efecto de la baicalina sobre la fusión celular. Co-cultivos de las distintas células se incubaron en ausencia o presencia de varias concentraciones de baicalina. Posteriormente las células se lisaron y los lisados se mezclaron con rojo clorofenol galactopiranósido, un sustrato de la β-galactosidasa que genera un producto rojo cuya absorbancia se puede medir a 570 nm (Li et al, 2000; Nussbaum et al, 1994).

Midiendo los niveles de b-galactosidasa expresada como consecuencia de la fusión (Figura 7), Li y colaborados (2000) obtuvieron que la baicalina inhibía la fusión mediada tanto por CXCR4 como por CCR5. El grado de inhibición fue proporcional a la concentración de baicalina y la concentración de compuesto necesaria para inhibir en un 50 % la fusión fue similar para ambos tipos de co-receptores (4 μM), por lo que el efecto de la sustancia no dependió del tropismo del VIH-1. Estos resultados se vieron confirmados por la ausencia de células multinucleadas gigantes (sincitios) en los co-cultivos celulares realizados con baicalina. En los sistemas no tratados con el compuesto sí se observó este fenómeno causado por la fusión celular. Los investigadores sugirieron que ciertamente la baicalina inhibía eficientemente la fusión de los viriones de VIH-1 a las células, posiblemente al actuar en etapas tempranas del ciclo de replicación viral. No obstante, para descartar la posibilidad de que el extracto actuara en etapas tardías del ciclo, es decir, a nivel de la formación de sincitios que se producen una vez que las proteínas virales se expresan en la membrana de las células infectadas, los mismos autores realizaron un ensayo de detección del DNA viral durante la fase temprana de la infección viral. Para ello infectaron células con cepas de VIH-1 M y T-trópicas en presencia o ausencia de baicalina. Dejaron transcurrir el tiempo suficiente para que ocurriera la replicación e integración viral, aislaron el DNA celular total y realizaron un PCR anidado en presencia de cebadores específicos para la región R/U5 del LTR del VIH. No se detectaron fragmentos del DNA amplificado en las células tratadas con el compuesto, mientras que en las células no tratadas sí. Esto confirmó la hipótesis de una actuación temprana del compuesto sobre el ciclo viral. Hay que resaltar que, si bien los resultados obtenidos en esta investigación con la baicalina son alentadores, no se realizaron en ningún momento ensayos control para evaluar la citotoxicidad del compuesto, por lo que no se puede excluir la posibilidad de que la baicalina tenga efectos nocivos sobre células sanas.

Introducción
Mecanismos de replicación del VIH
Compuestos naturales de plantas con actividad anti-VIH
Otros inhibidores de la adsorción: el ácido repandusínico de Phyllanthus niruri.
Compuestos que actúan a nivel de la replicación intracelular
Conclusiones
Referencias

NOTA: Toda la información que se brinda en este artículo es de carácter investigativo y con fines académicos y de actualización para estudiantes y profesionales de la salud. En ningún caso es de carácter general ni sustituye el asesoramiento de un médico. Ante cualquier duda que pueda tener sobre su estado de salud, consulte con su médico o especialista.





Instituto de Medicina Tropical - Facultad de Medicina - Universidad Central de Venezuela.
Elaborado por el Centro de Análisis de Imágenes Biomédicas Computarizadas CAIBCO,
caibco@ucv.ve
Este portal ha sido desarrollado gracias al apoyo del Fonacit