Microbiología Evaluación de Medios de Cultivo para Mycoplasma pneumoniae.
Resultados
Nuestros resultados indican
que luego de realizar el control de calidad para los medios de cultivo, no se
evidenció ningún tipo de crecimiento macroscópico en los medios de cultivo
probados, lo que muestra que la esterilidad de los mismos era satisfactoria.Durante la primera y segunda semana de
incubación de los medios CM y MBM inoculados con la cepa M.pneumoniae, no se evidenció variación en el pH de los medios.
Esto pudo ser corroborado posteriormente, ya que en los repiques o subcultivos
realizados a los siete (7) y a los catorce (14) días de incubación de los
caldos en las placas de agar (AM, AMI y agar PPLO) no se observó crecimiento. A
partir de la tercera semana de incubación de los medios líquidos, se observó un
leve viraje o cambio del indicador de pH. Exactamente el día diecisiete (17) se
realizó el tercer repique en placas de agar (AM, AMI y agar PPLO), en los
cuales al séptimo días de incubación se observó crecimiento bacteriano, con
colonias de morfología variable para cada uno de los medios (ver TABLA 2).
En ese primer aislamiento, en
el medio PPLO se observaron colonias de superficie granuladas, de tamaño
uniforme y pequeñas (ver FIGURA 1),
en comparación con las colonias
observadas en el medio AM, donde se presentaba gran diversidad de tamaño como
en forma, en la cual predominaba la colonia granulosa con centro denso (ver FIGURA
2).
Esta diferencia en la morfología de las colonias entre el agar PPLO y
el AM, pudiera atribuirse a la distinta composición de cada uno de los medios.
Por ejemplo, el agar PPLO emplea como uno de sus componentes extracto de
levadura dializado (no comercial), mientras que en el AM se emplea un extracto
de levadura comercial. Aun cuando en la literatura no se hace referencia al
efecto de estos componentes en la morfología, es posible que estas
modificaciones pudieran explicar los cambios en la morfología de la colonia,
aunque ciertamente no se puede afirmar. Luego de observar
detalladamente las placas de agar (PPLO, AM y AMI) en su totalidad con microscopio
óptico (objetivo 10X), el número de colonias en el agar PPLO y el AM fue
similar en un rango de 20 – 30 colonias por placa, no así en el AMI, ya que en
este el número de colonias fue marcadamente menor al encontrado en los medios
sin inhibidores en un rango de 8 – 10 colonias por placas (ver TABLA 2). Una vez evidenciado el crecimiento bacteriano en los caldos de
cultivo y la observación microscópica de colonias en las placas de agar, se
empleó la técnica de PCR a partir de los medios en caldos para determinar el
género y la especie del microorganismo, para ello se procedió a realizar la
amplificación de regiones conservadas del gen de adhesina P1 del M. pneumoniae
con los iniciadores MP-F/MP-R. Los productos de amplificación fueron
evidenciados mediante la observación con luz UV de una banda correspondiente al
producto de amplificación que se ubica aproximadamente en 325 pb correspondiente
al fragmento del gen de adhesina P1, confirmándose
así que el crecimiento correspondía a M.
pneumoniae (ver FIGURA 3).
NOTA:Toda la información que se brinda en este artículo es de carácter investigativo y con fines académicos y de actualización para estudiantes y profesionales de la salud. En ningún caso es de carácter general ni sustituye el asesoramiento de un médico. Ante cualquier duda que pueda tener sobre su estado de salud, consulte con su médico o especialista.
Instituto de Medicina Tropical - Facultad de Medicina - Universidad Central de Venezuela.
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