El material de estudio está constituido por siete cepas de Pseudomonas aeruginosa, aisladas de pacientes de ambos sexos con edades comprendidas entre 17 y 60 años, que fueron hospitalizados en el Hospital Vargas de Caracas, Venezuela, y quienes presentaban diferentes patologías ocasionadas por esta bacteria (Tabla 1). Las muestras se obtuvieron según las normas del Código de Bioética y Bioseguridad, capítulos 2 y 3 (36) y fueron procesadas según la metodología de Thompson y Millar, 2003 (37). Las cepas fueron aisladas e identificadas en el Laboratorio de Bacteriología de la Cátedra de Microbiología en la Escuela de Bioanálisis, Facultad de Medicina de la Universidad Central de Venezuela, siguiendo la metodología de Kiska y Gilligan, 2003 (38).

 

Las cepas previamente identificadas como Pseudomonas aeruginosa se sembraron por aislamiento en agar Mac conkey (Difco) y se incubaron a 35ºC de 18 a 24 horas. Posteriormente, se recolectaron las colonias necesarias para hacer una suspensión cuya turbidez fue comparable con el patrón Nº 1 de Mac Farland (39). Un ml de cada suspensión se agregó a 150 ml. de medio de cultivo Eagle (Gibco) libre de proteínas para evitar enmascarar los exoproductos propios de la bacteria, se incubaron a 35ºC con agitación constante, por el período de 18 a 24 horas, tiempo después del cual se recolectaron las bacterias mediante centrifugación a 27.138 x G por 10 minutos a 4ºC en una centrifuga Sorvall, rotor G16 y el sobrenadante obtenido se filtró en una membrana Millipore de 0,22 µm de diámetro de poro. A continuación, se dializó contra agua destilada, durante un lapso de 48 horas a 4ºC. Transcurrido este tiempo, las muestras se liofilizaron y se resuspendieron en 2 ml. de PBS pH 7.2, se les determinó la concentración de proteínas mediante el método de Lowry y Col., 1951 (40) modificado por Herbert y col, 1983 (41) y se conservaron a -20ºC hasta su uso.