Micología Presencia de flora fúngica en áreas internas del Hospital “Dr. Adolfo Prince Lara”, Puerto Cabello, Estado Carabobo. Durante el período 2006-2007.
Materiales y métodos
Se
recolectaron muestras de ambientes en la Unidad de Cuidados Intensivos (UCI),
Quirófano, Sala de Emergencia de Adultos, Sala de Emergencia de Niños y
Hospitalización Pediátrica, del Hospital “Dr. Adolfo Prince Lara”, siguiendo la técnica de sedimentación en placa descrita
por Silva y col. (13); que consistió en exponer durante 15 minutos 5 placas de
Petri con agar Sabouraud en diversos sitios de las áreas seleccionadas, en
los puntos donde existía flujo o corrientes de aire, las mismas se destaparon
evitando turbulencias ocasionadas por el paso de personas. Al transcurrir el
tiempo de exposición se procedió a tapar y rotular las placas.Se evaluóde manera cualitativa las características físicas de las cinco áreas
estudiadas observando el estado y funcionamiento de las mismas, se procedió a
observar las condiciones de la infraestructura, ventilación y limpieza del
centro hospitalario, así como también, se midió la temperatura y humedad de
cada área empleando el higrómetro.Para
la recolección de la muestras en Instrumentos, Equipos médicos, Parrillas de
aire acondicionado, Camillas, Estantes, Ventanas, Paredes y otras superficies se
empleó la técnica de hisopado. (5)La
misma consistió en utilizar un hisopo estéril humedecido en caldo Sabouraud
siendo pasado por las superficies de las áreas seleccionadas. Una vez recogida
las muestras se llevaron al Laboratorio de Micología del Departamento de
Microbiología de la Facultad de Ciencias de la Salud de la Universidad de
Carabobo, usando como medio de transporte un contenedor de anime, al cual
previamente se le realizaron pruebas de esterilidad.Las muestras obtenidas en placas por la
técnica de sedimentación por gravedad se les asignó las letra “P”, mientras que
las obtenidas por la técnica de hisopado fueron sembradas en placas con Agar
Sabouraud asignándole la letra “H” para su identificación, codificando a cada
una con las iniciales de las áreas seleccionadas,ambas fueron incubadas en estufa a 25 +/- 2° C
realizando monitoreo de las muestras a partir de las 48 horas, para verificar
el crecimiento de los microorganismos.Pasado el tiempo de incubación, se observó el crecimiento de las
colonias y se procedió al recuento de las mismas mediante un contador de
colonias que proporciona el número de unidades formadoras de colonias.
Identificación de las Colonias
De
acuerdo al tipo de hongo a identificar se realizaron distintos procedimientos.
Mohos:
Examen
Macroscópico: las características de las colonias se describieron (14), como el
grado de crecimiento, aspecto superficial: plana, amontonada, festoneada,
radiada; textura: globosa, aterciopelada, granulosa, algodonosa, presencia de
pigmentos en el anverso y reverso de la placa. Examen Microscópico: se utilizó el método de Cinta adhesiva
transparente, el cual consistió en poner en contacto un trozo de cinta no mayor
de 4 cm. sobre las colonias de dos días de crecimiento, de forma suave a fin de
que se adhirieran los micelios aéreos y no dañar las colonias, luego se separó
la cinta suavemente y se colocó sobre una lamina porta objeto
agregándosele1 o 2 gotas de Azul de
Lactofenol, se cubrió con una laminilla y se procedió a sellar los bordes de
las laminas; observándose al microscopio con objetivos de 10x y 40x, obteniendo
de esta manera las características propias de cada uno de los hongos
encontrados. (15)
Levaduras:
Examen
Macroscópico: las levaduras producen colonias circulares, opacas o pastosas, de
color crema o rosada.(16)
Examen
Microscópico:
Directo:
utilizando un asa de platino doblada en forma de L, se tomaron pequeñas
porciones de las colonias a estudiar, este material se colocó enláminas porta objetos que contenían 1 o 2
gotas de solución salina al 0,85% y sobre éstas una lámina cubreobjetos, para
ser observados al microscopio con objetivos de 10x y 40x. Este examen permite establecer
diferenciasentre bacterias y levaduras.
(17)
Azul
de Lactofenol: se empleó la técnica aplicada por Campbell (15), se seleccionó
una colonia aislada, con la ayuda de un asa de siembra esterilizada. Se
depositó el fragmento extraído sobre un portaobjetos el cual previamente
contenía una gota de azul de Lactofenol, posteriormente se cubrió con una
lamina cubreobjetos presionándose suavemente para dispersar la colonia, la
muestra estuvo disponible para su observación al microscopio, usando el
objetivo de 40X.
Prueba
del Tubo Germinativo: Se realizó la prueba que consistió en suspender un
inoculo de células de la levadura obtenidas a partir de una colonia aislada en
0,5 ml de suero de humano. Luego se incubaron los tubos a 35°C, por dos horas.
Después de la incubación, se tomó una gota de la suspensión y se colocó sobre un
portaobjetos. Se observó al microscopio con objetivo de 40X, buscando lapresencia de tubos germinativos que son
específicos para la identificación de Candida
albicans. (18)
Tinta
China: esta prueba se utiliza para demostrarla capsula de Cryptococcus
neoformans, la cual se distingue como un halo claro alrededor de las
células. Se realizó colocando en lámina y laminilla una gota de tinta china
junto con una colonia y luego se observó
al microscopio con objetivo de 40X. (14)
NOTA:Toda la información que se brinda en este artículo es de carácter investigativo y con fines académicos y de actualización para estudiantes y profesionales de la salud. En ningún caso es de carácter general ni sustituye el asesoramiento de un médico. Ante cualquier duda que pueda tener sobre su estado de salud, consulte con su médico o especialista.
Instituto de Medicina Tropical - Facultad de Medicina - Universidad Central de Venezuela.
Elaborado por el Centro de Análisis de Imágenes Biomédicas Computarizadas CAIBCO, caibco@ucv.ve
Este portal ha sido desarrollado gracias al apoyo del Fonacit