Virología
Fiebres hemorrágicas por arenavirus en Venezuela
Diagnóstico de la Fiebre Hemorrágica Venezolana
Toma, conservación y transporte de las
muestras para el diagnóstico de laboratorio de la Fiebre Hemorrágica
Venezolana
Las muestras deben ser tomadas bajo estrictas medidas de esterilidad y bioseguridad.
Pueden ser conservadas hasta por 24 horas a –4ºC y enviadas inmediatamente
al laboratorio de aislamiento viral del Instituto Nacional de Higiene “Rafael
Rangel” (INHRR) o al Centro de Investigaciones de Virosis Hemorrágicas
y Enfermedades Transmisibles (CIVIHET). En caso de almacenamiento, conservarlas
a –80ºC, es decir, ultrabaja temperatura o en nitrógeno
líquido, hasta su posterior envío y procesamiento.
Ya que es necesaria la implementación de medidas de bioseguridad y
esterilidad de las muestras biológicas recolectadas para los estudios
de laboratorio, se recomienda la utilización de crioviales para efectos
de almacenamiento y transporte (envío) de las muestras. El empleo de
guantes, tapabocas, tubos y camisas Vacutainer es muy importante. En el caso
de pacientes con diagnóstico clínico probable de FHV, pacientes
ingresados en la UCI y fallecidos, es indispensable el uso de equipos de protección
de alta seguridad.
En el caso de muestras serológicas para estudios de aislamiento viral,
es recomendable que el volumen de suero sea suficiente para la realización
de todos los estudios virales, y debe ser dispensado en el criovial hasta
que sólo ocupe la marca indicada en el mismo, ya que cuando se congela
el líquido, el sólido formado ocupa mayor espacio, lo cual implica
un alto riesgo biológico, pues el criovial puede romperse o explotar.
El envío debe hacerse en recipientes especiales según los patrones
establecidos para el transporte de muestras biológicas de alto riesgo
infeccioso. En caso de pacientes fallecidos, debe realizarse la autopsia.
Se toman pequeños fragmentos de tejido (pulmón, hígado,
bazo), se colocan en viales individuales sin agregarle formol ni solución
salina, se rotulan con la identificación del paciente y se envían
inmediatamente las muestras refrigeradas a Epidemiología o a la Coordinación
de Estudios de Fiebre Hemorrágica Venezolana. Si se envían directamente
al Instituto Nacional de Higiene, hacerlo en suficiente hielo seco.
Diagnóstico de laboratorio de la Fiebre
Hemorrágica Venezolana
Aislamiento Viral
El diagnóstico etiológico específico de la FHV puede
hacerse mediante el aislamiento e identificación del virus Guanarito
a partir de muestras serológicas seriadas, tomadas durante la fase
aguda de la enfermedad, es decir, al 1, 3, 5 ,7 y 10 días del inicio
del cuadro clínico o a partir de sangre y tejidos en los casos fatales.
La utilización de líneas celulares, tales como células
Vero E-6 y posterior aplicación de la técnica de Inmunofluorescencia
Indirecta (IFI), empleando anticuerpos monoclonales específicos contra
el virus Guanarito, permite confirmar el posible aislamiento del agente viral.
RT-PCR
Mediante la amplificación parcial del ARN viral, por la técnica
de reacción en cadena de la polimerasa, utilizando transcriptasa reversa
(RT-PCR) y primers específicos para el virus Guanarito, se puede lograr
un diagnóstico confirmatorio de la FHV.
Serología
También se puede utilizar la detección de anticuerpos específicos
clase Ig G en muestras de suero recolectadas en la fase convaleciente de la
enfermedad, es decir, a los 5, 7, 10, 15, 40 y 70 días, utilizando
la técnica de IFI cuantitativa o el ensayo inmunoenzimático
ELISA, para la detección de anticuerpos clase específicos tipo
Ig M e Ig G.
Esquema cronológico de toma y número de muestras a colectar
| |
1 |
3 |
5 |
7 |
10 |
15 |
40 |
70 |
| Estudio serológico |
X |
|
X |
|
X |
X |
X |
X |
| Aislamiento viral |
X |
X |
X |
X |
X |
|
|
|
| PCR |
X |
X |
|
X |
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Toma, conservación y transporte de las
muestras para el diagnóstico de laboratorio de la Fiebre Hemorrágica
Venezolana
Las muestras deben ser tomadas bajo estrictas medidas de esterilidad y bioseguridad.
Pueden ser conservadas hasta por 24 horas a –4ºC y enviadas inmediatamente
al laboratorio de aislamiento viral del Instituto Nacional de Higiene “Rafael
Rangel” (INHRR) o al Centro de Investigaciones de Virosis Hemorrágicas
y Enfermedades Transmisibles (CIVIHET). En caso de almacenamiento, conservarlas
a –80ºC, es decir, ultrabaja temperatura o en nitrógeno
líquido, hasta su posterior envío y procesamiento.
Ya que es necesaria la implementación de medidas de bioseguridad y
esterilidad de las muestras biológicas recolectadas para los estudios
de laboratorio, se recomienda la utilización de crioviales para efectos
de almacenamiento y transporte (envío) de las muestras. El empleo de
guantes, tapabocas, tubos y camisas Vacutainer es muy importante. En el caso
de pacientes con diagnóstico clínico probable de FHV, pacientes
ingresados en la UCI y fallecidos, es indispensable el uso de equipos de protección
de alta seguridad.
En el caso de muestras serológicas para estudios de aislamiento viral,
es recomendable que el volumen de suero sea suficiente para la realización
de todos los estudios virales, y debe ser dispensado en el criovial hasta
que sólo ocupe la marca indicada en el mismo, ya que cuando se congela
el líquido, el sólido formado ocupa mayor espacio, lo cual implica
un alto riesgo biológico, pues el criovial puede romperse o explotar.
El envío debe hacerse en recipientes especiales según los patrones
establecidos para el transporte de muestras biológicas de alto riesgo
infeccioso. En caso de pacientes fallecidos, debe realizarse la autopsia.
Se toman pequeños fragmentos de tejido (pulmón, hígado,
bazo), se colocan en viales individuales sin agregarle formol ni solución
salina, se rotulan con la identificación del paciente y se envían
inmediatamente las muestras refrigeradas a Epidemiología o a la Coordinación
de Estudios de Fiebre Hemorrágica Venezolana. Si se envían directamente
al Instituto Nacional de Higiene, hacerlo en suficiente hielo seco.
Diagnóstico de laboratorio de la Fiebre
Hemorrágica Venezolana
Aislamiento Viral
El diagnóstico etiológico específico de la FHV puede
hacerse mediante el aislamiento e identificación del virus Guanarito
a partir de muestras serológicas seriadas, tomadas durante la fase
aguda de la enfermedad, es decir, al 1, 3, 5 ,7 y 10 días del inicio
del cuadro clínico o a partir de sangre y tejidos en los casos fatales.
La utilización de líneas celulares, tales como células
Vero E-6 y posterior aplicación de la técnica de Inmunofluorescencia
Indirecta (IFI), empleando anticuerpos monoclonales específicos contra
el virus Guanarito, permite confirmar el posible aislamiento del agente viral.
RT-PCR
Mediante la amplificación parcial del ARN viral, por la técnica
de reacción en cadena de la polimerasa, utilizando transcriptasa reversa
(RT-PCR) y primers específicos para el virus Guanarito, se puede lograr
un diagnóstico confirmatorio de la FHV.
Serología
También se puede utilizar la detección de anticuerpos específicos
clase Ig G en muestras de suero recolectadas en la fase convaleciente de la
enfermedad, es decir, a los 5, 7, 10, 15, 40 y 70 días, utilizando
la técnica de IFI cuantitativa o el ensayo inmunoenzimático
ELISA, para la detección de anticuerpos clase específicos tipo
Ig M e Ig G.
Esquema cronológico de toma y número de muestras a colectar
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3 |
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| Estudio serológico |
X |
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| Aislamiento viral |
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| PCR |
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