Farmacología
Valoración de niveles séricos y óseos de calcio, cobre, estroncio, hierro, magnesio y zinc en pacientes con osteoporosis
Materiales, métodos y Muestreo
Aparatos
y reactivos
El estroncio fue determinado en muestras óseas por Espectroscopia de
Absorción Atómica (EAA) con llamas de óxido nitroso/acetileno,
en un equipo Perkin-Elmer 3100 37 mientras que en sangre se determinó
por EAA con atomización electrotérmica en un equipo Perkin-Elmer
4100 38 . Todos los reactivos utilizados en este trabajo fueron del
más alto grado analítico, excepto el ácido nítrico
que fue Suprapur â (65 %) de la Merck. Agua doblemente de-ionizada con
resistividad especifica de 18 M W cm -1 , obtenida en un sistema Millipore Milli-Q
Plus se usó para la preparación de todas las soluciones y para
enjuagar el material de laboratorio. Se preparó un patrón de estroncio
( 1 g L -1 ) disolviendo la cantidad apropiada de nitrato de estroncio anhidro
(99 % de la Merck ) en 500 ml de ácido nítrico 0.2 % (v/v).
Diariamente
se prepararon las soluciones de trabajo en el rango 0.0 a 20.0 m g L -1 por
diluciones sucesivas del patrón. Algunos compuestos químicos se
probaron como posibles modificadores de matriz: nitratos de magnesio, lantano,
níquel, talio y paladio y óxidos de samario, europio, terbio,
holmio, erbio, tulio y lutecio. El nitrato de lantano al 0.4 % (p/v) se preparó
al disolver la cantidad apropiada de la sal hexahidratada (La (NO 3 ) 2 . 6H
2 O, 99 % de la Sigma ) en agua, mientras que los demás nitratos sólo
se disuelven en ácido nítrico 0.2 % (v/v). Soluciones transparentes
de los óxidos se han obtenido en ácido nítrico 1:1 bajo
agitación ultrasónica por 20 min. Triton X-100, 0.1 % (v/v) preparado
por dilución con agua del reactivo concentrado de la BDH , se utilizó
para diluir las muestras de sangre y evitar problemas experimentales asociados
con la viscosidad de las muestras reales. Argón de alta pureza (99.99
% de AGA) se utilizó como gas de purga de los tubos de grafito.
Para
evitar contaminación exógena, los utensilios de laboratorio utilizados
en la preparación de reactivos y muestras fueron rigurosamente lavados
con ácido nítrico (10 %) y enjuagados copiosamente con agua antes
de ser usados. En lo posible, se debe evitar el uso de material de vidrio, por
lo que las muestras y las soluciones de trabajos se deben almacenar en envases
de polietileno.
Muestreo
y preparación de las muestras
Las
muestras de sangre y huesos analizadas en este trabajo fueron suministradas
por el Departamento de Traumatología de la Facultad de Medicina de la
Universidad de Los Andes. Provienen de pacientes enfermos que por algún
motivo consultaron o fueron intervenidos quirúrgicamente por presentar
molestias o enfermedades óseas.
El muestreo
(5 ml de sangre completa), se realizó por punción venosa del antebrazo
en tubos “vacutainer” heparinizados con tapas de polietileno. Después
de mezclarlas suavemente por inversión, las muestras se guardaron bajo
refrigeración (4 ºC) hasta el momento del análisis. Antes
de analizarlas, las muestras fueron sacadas del refrigerador y dejadas para
adquirir temperatura ambiente. Luego de homogeneizarlas en un vortex, las muestras
de sangre se diluyen 1:10 con Triton X-100 0.1 % (v/v). Para efecto de optimización
de parámetros instrumentales se preparó un pool de sangre combinando
pequeños volúmenes de cada muestra independiente en un mismo envase.
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