Abril-Junio 2018 74
ISSN 1317-987X
 
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Micología
Cinética de crecimiento de aislamientos autóctonos de Aspergillus sección Fumigati

Materiales y métodos

Aislamientos fúngicos
Se analizaron cinco aislamientos fúngicos autóctonos y una cepa de referencia. A cada uno de ellos se les verificó la identificación fenotípica realizando estudios micológicos (cultivos en agar Sabouraud a 25 y 37°C) y usando claves taxonómicas (24) (Tabla I).

Tabla I.Aislamientos y cepa deAspergillussecciónFumigati.
EB-UCV: Escuela de Bioanálisis-UCV, UIDJA: Unidad de Información y Documentación Jorge Ahumada CENDES-UCV. INHRR: Instituto Nacional de Higiene “Rafael Rangel”. NCPF-MRL: National Collection of Pathogenic Fungi, Mycological reference laboratory.

Cinética de crecimiento
Preparación del inóculo fúngico 
Se siguió la metodología reportada previamente (7), con algunas modificaciones. Se hicieron tres resiembras cada tres días en agar Sabouraud (AS) a temperatura ambiente (TA) seguidos de tres subcultivos en 30 mL de Sabouraud líquido (SL) con intervalos de tres días cada uno, en agitación mecánica constante (80 rpm)  a 28 ºC. Luego, el cultivo fúngico se homogeneizó (homogeneizador IKA-WERK®) y diluyó lo suficiente con SL  para obtener una DO de 0,024 a 540 nm.

Estandarización de los tiempos de lectura
Para ello se escogió, al azar, el aislamiento Nº 1 y con él se realizaron tres protocolos para curvas de crecimiento utilizando diferentes tiempos de lectura y el inóculo estandarizado. 

Curvas de crecimiento
Se escogió el protocolo Nº 3 por ser el que permitió la mejor definición de las fases de crecimiento; en este se efectuaron 11 lecturas,  las dos primeras cada 12 h, las tres lecturas siguientes se hicieron con intervalos de tres h, la sexta se efectuó 12 h después, las cuatro siguientes con intervalos de tres h y la última se ejecutó 12 h  más tarde, a las 60 h.  
Se inocularon fiolas de 50 mL con 10 mL del inóculo estandarizado y se incubó bajo las condiciones ya descritas. Se midió la turbidez fúngica generada a 540 nm a los diferentes tiempos (previa homogenización de los 10mL del inoculo). Cada determinación se hizo por duplicado.  
Los datos obtenidos fueron   graficados (tiempo vs. DO) usando Microsoft Excel 2010. Se realizó un control de pureza en AS a TA antes de la lectura de DO. 

Parámetros de la cinética de crecimiento
Tiempo de generación (Tg)
Es el tiempo requerido para que la biomasa se duplique. Se obtuvo de la fase de crecimiento exponencial, a partir de la ecuación de la recta cuya expresión matemática es Tg=ln 2/m, donde ln= logaritmo neperiano; m= pendiente (1, 3, 25).

Constante de velocidad de crecimiento (k)
Es una medida del número de generaciones que ocurre por unidad de tiempo (una hora) en un cultivo con crecimiento exponencial y se expresa con la ecuación k =ln2/Tg (1, 25).

Estudio microscópico
Para ello, simultáneamente con cada lectura espectrofotométrica, se colocó una gota del cultivo fúngico y una gota de azul de lactofenol, entre lámina y laminilla; se realizó la descripción morfológica y se registró fotográficamente.

Los resultados se presentaron en valores absolutos, en porcentajes, promedios, tablas y gráficos.



Continua: Resultados

Cinética de crecimiento de aislamientos autóctonos de Aspergillus sección Fumigati
Introducción
Materiales y métodos
Resultados
Discusión
Bibliografía

NOTA: Toda la información que se brinda en este artículo es de carácter investigativo y con fines académicos y de actualización para estudiantes y profesionales de la salud. En ningún caso es de carácter general ni sustituye el asesoramiento de un médico. Ante cualquier duda que pueda tener sobre su estado de salud, consulte con su médico o especialista.





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