Para ello se escogió, al azar, el aislamiento Nº 1 y con él se realizaron tres protocolos para curvas de crecimiento utilizando diferentes tiempos de lectura y el inóculo estandarizado.
Se escogió el protocolo Nº 3 por ser el que permitió la mejor definición de las fases de crecimiento; en este se efectuaron 11 lecturas, las dos primeras cada 12 h, las tres lecturas siguientes se hicieron con intervalos de tres h, la sexta se efectuó 12 h después, las cuatro siguientes con intervalos de tres h y la última se ejecutó 12 h más tarde, a las 60 h.
Se inocularon fiolas de 50 mL con 10 mL del inóculo estandarizado y se incubó bajo las condiciones ya descritas. Se midió la turbidez fúngica generada a 540 nm a los diferentes tiempos (previa homogenización de los 10mL del inoculo). Cada determinación se hizo por duplicado.
Los datos obtenidos fueron graficados (tiempo vs. DO) usando Microsoft Excel 2010. Se realizó un control de pureza en AS a TA antes de la lectura de DO.
Parámetros de la cinética de crecimiento
Tiempo
de generación (Tg)
Es el tiempo requerido para que la biomasa se
duplique. Se obtuvo de la fase de crecimiento exponencial, a partir de la
ecuación de la recta cuya expresión matemática es Tg=ln 2/m, donde ln= logaritmo
neperiano; m= pendiente (1, 3, 25).
Constante
de velocidad de crecimiento (k)
Es una medida del número
de generaciones que ocurre por unidad de tiempo (una hora) en un cultivo con
crecimiento exponencial y se expresa con la ecuación k =ln2/Tg (1, 25).
Estudio microscópico
Para ello, simultáneamente con cada lectura
espectrofotométrica, se colocó una gota del cultivo fúngico y una gota de azul
de lactofenol, entre lámina y laminilla; se realizó la descripción morfológica
y se registró fotográficamente.
Los
resultados se presentaron en valores absolutos, en porcentajes, promedios, tablas
y gráficos.