Abril-Junio 2018 74
ISSN 1317-987X
 
Buscar




Artículos
 



Anatomía Patológica
Expresión Inmunohistoquímica del Antígeno Ki-67 en Relación con el Grado Histológico y Riesgo de Recidivas en Meningiomas Intracraneanos

Población y métodos

Entre los años 1.980 a 2.003, se registraron en la Sección de Neuropatología del Instituto Anatomopatológico “Dr. José A. O´Daly” de la Universidad Central de Venezuela (IAP-UCV) un total de 580 meningiomas pertenecientes a 532 pacientes, de los cuales 455 tumores correspondieron a meningiomas no recidivantes (455 pacientes), 110 a meningiomas recidivantes (67 pacientes) y 15 a meningiomas múltiples (10 pacientes). Todos estos casos fueron revisados clínica e histológicamente antes de la selección de la muestra del estudio.

De las historias clínicas y/o solicitudes de biopsia fueron anotados los datos de identificación de cada paciente, edad para el momento de la primera cirugía, sexo, presentación clínica, localización del tumor, extensión de la resección quirúrgica macroscópica inicial (total/parcial), número e intervalo de recidivas, tiempo de seguimiento clínico post-operatorio y antecedentes personales y/o familiares de importancia. La supervivencia libre de recidivas fue definida como el intervalo de tiempo (en meses) transcurrido desde la fecha del tratamiento quirúrgico inicial hasta la fecha del último control médico para el caso de los meningiomas no recidivantes o hasta la fecha de la subsecuente intervención quirúrgica en caso de meningiomas recidivantes. Cuando presentes, se anotaron también el intervalo de aparición de metástasis y la fecha de muerte del paciente, registrando además la causa del fallecimiento.

Los bloques de parafina con tejido tumoral incluido y las láminas histológicas correspondientes, teñidas con hematoxilina y eosina y demás coloraciones especiales, tanto del tumor inicial como de las recidivas, fueron revisadas histológicamente. Se anotaron en cada caso el tipo histológico predominante del tumor (según el esquema de clasificación de la OMS), el índice mitótico (recuento de mitosis en 10 campos microscópicos consecutivos de 400x) y la presencia/ausencia de hipercelularidad, células pequeñas, crecimiento en láminas, macronucléolos, necrosis, pérdida de diferenciación meningotelial e invasión al parénquima nervioso y/o de otras estructuras adyacentes al tumor.

Los meningiomas fueron clasificados en tres grados histológicos (I, II y III) siguiendo el esquema de la OMS (7) y las recomendaciones de Perry y col. (4). Se catalogaron como meningiomas benignos (grado I) los subtipos meningotelial, fibroblástico, transicional, psammomatoso, angiomatoso, microquístico, secretor, linfoplasmocitario y metaplásico que no presentaron características histopatológicas de atipicidad o malignidad (7). Fueron considerados meningiomas atípicos (grado II) aquellos tumores que cumplieron con cualquiera de los siguientes criterios histopatológicos: 1) actividad mitótica ³ 4 mitosis en 10 campos microscópicos de 400x; 2) presencia de al menos tres de las siguientes características: incremento de celularidad, células pequeñas con aumento de relación núcleo/citoplasma, nucleólos prominentes y crecimiento en láminas; o, 3) invasión del parénquima nervioso (4,7). Como meningiomas malignos o anaplásicos (grado III) fueron clasificados aquellos tumores que llenaron cualquiera de los siguientes criterios histopatológicos: 1) elevada actividad mitótica ³ 20 mitosis en 10 campos microscópicos de 400x); o, 2) citología obviamente maligna con pérdida de la diferenciación meningotelial (tumor parecido a sarcoma, carcinoma o melanoma), bien sea de manera focal o difusa (4,7). En el grado II también fueron incluidos los meningiomas de células claras y cordoide, mientras que el grado III abarcó además a los meningiomas rabdoide y papilar (4,7). Aquellos meningiomas de difícil reconocimiento histopatológico (especialmente tumores indiferenciados de alto grado histológico) fueron diagnosticados y clasificados como tales si presentaban diferenciación meningotelial en una biopsia previa o atributos de meningiomas desde el punto de vista inmunohistoquímico y/o ultraestructural.

El estudio inmunohistoquímico del antígeno Ki-67 fue realizado en los casos que cumplieron con los siguientes criterios de inclusión: 1) edad igual o mayor de 20 años; 2) localización intracraneana del tumor; 3) información clínica completa; 4) resección quirúrgica macroscópica inicial equivalente a 100% del tumor; 5) tiempo de seguimiento clínico post-operatorio no menor de 5 años para los meningiomas no recidivantes o información disponible acerca de las intervenciones quirúrgicas subsecuentes en caso de meningiomas recidivantes; y, 6) material histológico disponible de buena calidad representativo del tumor inicialmente resecado.

Luego de la exclusión de los pacientes con meningiomas múltiples y de la aplicación de los criterios de inclusión en los pacientes restantes, un total de 46 casos fueron seleccionados para la comparación de los IM del antígeno Ki-67 entre meningiomas no recidivantes (n = 23) y recidivantes (n = 23). En el primer grupo se incluyeron 11 meningiomas transicionales, 2 meningoteliales, 2 fibroblásticos, 3 microquísticos, 2 secretores, 1 metaplásico (xantomatoso) y 2 atípicos. El grupo de tumores recidivantes estuvo conformado por 13 meningiomas transicionales, 2 meningoteliales, 2 fibroblásticos, 1 microquístico, 1 metaplásico (xantomatoso), 2 atípicos, 1 de células claras y 1 papilar.

Mediante selección realizada al azar, se incluyeron 47 pacientes adicionales para obtener números representativos de tumores dentro de cada grado histológico (41 meningiomas grado I, 23 grado II y 10 grado III) y poder comparar así los IM del antígeno Ki-67 entre los diferentes grados histológicos de los meningiomas. Dentro del grado I se incluyeron 11 meningiomas transicionales y cinco de cada uno de los siguientes subtipos: meningotelial, fibroblástico, microquístico, angiomatoso, secretor y metaplásico (xantomatoso). Los tumores grado II estuvieron conformados por 12 meningiomas atípicos, 9 de células claras y 2 cordoides, mientras que para el grado III se seleccionaron 4 meningiomas malignos y 6 papilares.

Se utilizó un anticuerpo primario monoclonal de ratón (Ki-S5; Dako, Glostrup, Dinamarca; dilución 1:25) para la detección inmunohistoquímica del antígeno Ki-67 en los casos seleccionados. Para tal efecto, cortes histológicos de 4 mde espesor representativos de cada tumor fueron montados en láminas silanizadas, desparafinados en xilol y rehidratados con pasos sucesivos de alcoholes de grado decreciente hasta agua desionizada. La actividad de peroxidasa endógena y las uniones electrostáticas inespecíficas fueron bloqueadas respectivamente con solución de peróxido de hidrógeno al 3% en metanol y un agente bloqueante de proteínas (Immunon Shandon, Pittsburg, EEUU). La recuperación antigénica se efectuó por calor con una vaporera de marca comercial durante 30 minutos, para lo cual se dejaron las láminas inmersas en solución recuperadora blanco de Dako de pH 6.1. Posterior al lavado con solución de tris buffer salino con tween 20 (TBST), las láminas fueron colocadas en contenedores adecuados y los siguientes pasos realizados en el aparato automático Dako AutoStainer. El anticuerpo primario fue incubado sobre las secciones histológicas a temperatura ambiente durante una hora, seguido de lavado con TBST. Utilizando el sistema de detección y amplificación EnVision (Dako, Carpintería, EEUU), se aplicó un anticuerpo secundario anti-IgG de ratón unido a un polímero de dextrano marcado con peroxidasa de rábano blanco, con tiempo de incubación de 20 minutos a temperatura ambiente, seguido de lavado de las láminas histológicas con TBST. Posteriormente, se aplicó una mezcla conteniendo peróxido de hidrógeno como substrato y el cromógeno 3,3´-diaminobencidina (sistema DynaChrome; ThermoShandon, Pittsburg, EEUU) durante 10 minutos, seguido de lavado con agua corriente. Finalmente, los preparados histológicos fueron contrastados con hematoxilina de Mayer, deshidratados y cubiertos con laminillas. Se utilizó como control positivo del método inmunohistoquímico un adenocarcinoma ductal invasor de mama con reactividad conocida para el antígeno Ki-67, en tanto que la omisión del anticuerpo primario sobre un corte histológico seriado de este mismo tumor generó el respectivo control negativo.

Sólo la inmunotinción nuclear fue considerada positiva para el antígeno Ki-67, independientemente del grado de intensidad de la misma. El índice de marcaje inmunohistoquímico (IM) fue expresado como el porcentaje de células neoplásicas inmunopositivas sobre un total no menor de 3.000 células tumorales contabilizadas en campos microscópicos consecutivos de 400x, iniciando el recuento en aquellas áreas del tumor con mayor densidad de células inmunoreactivas. El cálculo del IM sobre 3.000 células tumorales fue realizado con el objeto de evitar la sobre-estimación de resultados ocasionada por la heterogeneidad tumoral. Para el recuento celular se digitalizaron los campos microscópicos necesarios dentro de cada tumor con el capturador de imágenes Image-Proâ Plus version 3.0 for WindowsTM (Media Cybernetics, L.P; Silver Spring, Maryland, EEUU). Una vez obtenidos los IM del antígeno Ki-67 en cada uno de los casos seleccionados, se procedieron a estimar sus valores promedios y rangos para los grupos de meningiomas recidivantes y no recidivantes, así como para los diferentes grados histológicos.

Todos los datos obtenidos de la investigación fueron tabulados y analizados en base a los objetivos planteados. Las diferencias observadas en relación con los valores promedios y rangos de los IM del antígeno Ki-67 entre meningiomas recidivantes y no recidivantes y entre los diferentes grados histológicos fueron evaluadas mediante las pruebas estadísticas c2, prueba de probabilidad exacta de Fisher, t test no pareado y ANOVA de una vía, utilizando para ello un intervalo de confianza de 95% y un valor de p significativo menor de 0,05. Para tal efecto, se emplearon los programas computarizados Microsoft Excel, EPISTAT, Graphpad Instat y Sigma Plot. Los puntos de corte del IM del antígeno Ki-67 entre meningiomas no recidivantes y recidivantes y entre meningiomas de diferentes grados histológicos fueron establecidos a través del programa computarizado TG-ROC (Two-Graph Receiver Operating Characteristic, versión 070397e for MS-Excel) (66). La sensibilidad, la especificidad y los valores predictivos positivos y negativos de cada punto de corte fueron estimados con un intervalo de confianza de 95%. Finalmente, las curvas de supervivencia libres de recidivas fueron graficadas mediante el método de Kaplan-Meier y evaluadas estadísticamente con el log-rank test a través del programa WinSTAT for Excel (R. Fitch Software, versión 2005.1).



Continua: Resultados

Expresión Inmunohistoquímica del Antígeno Ki-67 en Relación con el Grado Histológico y Riesgo de Recidivas en Meningiomas Intracraneanos
Introducción
Población y métodos
Resultados
Discusión
Bibliografía

NOTA: Toda la información que se brinda en este artículo es de carácter investigativo y con fines académicos y de actualización para estudiantes y profesionales de la salud. En ningún caso es de carácter general ni sustituye el asesoramiento de un médico. Ante cualquier duda que pueda tener sobre su estado de salud, consulte con su médico o especialista.





Instituto de Medicina Tropical - Facultad de Medicina - Universidad Central de Venezuela.
Elaborado por el Centro de Análisis de Imágenes Biomédicas Computarizadas CAIBCO,
caibco@ucv.ve
Este portal ha sido desarrollado gracias al apoyo del Fonacit