Se utilizaron ratas Sprague-Dawley provenientes del bioterio del Instituto de Medicina Experimental, Universidad Central de Venezuela (Caracas), con un peso de 350 ± 35 g, mantenidos con comida (Ratarina®) y agua a voluntad. Se inyectaron intraperitonealmente con tiopental sódico (50 mg/Kg de peso) y mediante toracotomía media se extrajo ad bloc el corazón y la arteria pulmonar principal y luego se identificó y cortó pequeños anillos de la arteria pulmonar principal. Estos fueron colocados en una solución de Krebs-Henseleit con la siguiente composición (en mM/litro): NaCl, 119; KCl, 4,7; MgSO₄ 1,5; KH2PO₄, 1,2; NaHCO₃ , 25; CaCl₂ , 2,5; MgSO₄ , 1,2 y glucosa, 11, burbujeada constantemente con 95% O₂ , 5% CO₂ a 37° C, pH= 7,4. Estos anillos se montaron en dos estribos de acero inoxidable y se llevaron a un baño para órgano aislado (15 mL) conectado a un transductor de fuerza-desplazamiento FTO3, (Grass Instruments C.O. Quince, Mass. USA) y este, a su vez, a un preamplificador Grass, modelo 7C, con una tensión inicial de dos gramos. Se estabilizó durante 2 horas y se indujo una primera contracción con una solución de KCl= 40 mM para asegurar la viabilidad de la preparación. Se registró la respuesta en un polígrafo Grass, Modelo 7C a una velocidad de 2,5 mm/min. Para determinar si el endotelio estaba intacto funcionalmente, se añadió acetilcolina a una concentración de 1 x 10^-6 M a la arteria pulmonar principal contraída, según el método de Furchgott y Zawadzki ⁽¹⁸⁾. Los experimentos fueron expresados como la media ± el error estándar (X±EEM). La significación estadística fue determinada por la prueba no pareada de t de Students para dos grupos de comparación. Una regresión no lineal simple se realizó en cada curva de dosis-respuesta (Graphpad Software Inc. Versión 6,01). Las curvas de dosis-respuesta al nitroprusiato de sodio se realizaron en un rango de concentraciones de 1 x 10^-9 M, hasta 1 x 10^-5 M y las del tadalafil, vardenafil y sildenafil, se realizaron entre de 1 x 10^-7 M, hasta 1 x 10^-4 M. En otra serie de experimentos se estimuló con KCl= 40 mM; y luego de alcanzarse la contracción máxima se realizó una curva de dosis respuesta al sildenafil, (1 x 10^-9 a 1 x 10^-4 M) y con nitroprusiato de sodio 1 x 10^-10 M, hasta 1 x 10^-6 M. En otros experimentos se estimuló con norepinefrina (1 x 10^-6 M), donde al alcanzarse la respuesta máxima se añadieron concentraciones crecientes de sildenafil, tadalafil, vardenafil (1 x 10^-9 a 1 x 10^-6 M) y de nitroprusiato de sodio, 1 x 10^-7 M, hasta 1 x 10^-4 M.

Se realizaron curvas de dosis respuesta a la NE (1 x 10^-10 hasta 1 x 10^-5 M) en ausencia y en presencia de nitroprusiato de sodio (1 x 10^-8 M) y sildenafil (5 x 10^-4 M) y de NTPNa en ausencia y en presencia de azul de metileno (MB) (1 . 10^-5 M). Se administró 24 horas antes del sacrificio del animal una dosis de reserpina de 2 mg/Kg de peso, vía intraperitoneal