El presente trabajo se enmarcó en el tipo de investigación descriptiva, comparativa y de corte transversal. La muestra fue conformada por 50 personas elegidas en base a los siguientes criterios de inclusión: personas de ambos sexos dispuestas a participar en el estudio voluntariamente, mayores de 18 años, con buenos hábitos alimenticios, no fumadores y de poco o esporádico consumo de alcohol. Se excluyeron personas que con enfermedades crónicas o hematológicas y aquellas ocupacionalmente expuestas a metales pesados.

Recolección de muestras sanguíneas. Para la extracción de las muestras sanguíneas, se procedió siguiendo las reglas de asepsia y antisepsia. Se extrajeron 5 mL de sangre de la vena antecubital con inyectadora y aguja de 21G x 1’’, trasfiriendo el contenido a un tubo con ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) para el análisis de plomo. Ninguna muestra presentó coágulos o hemólisis.

Asimismo, a cada individuo participante en el estudio se le tomó una muestra de orina puntual (la primera orina de la mañana, antes de iniciar las actividades), en envases plásticos limpios, previa indicación para su correcta recolección.

Para el análisis de plomo (Pb) se empleó el método recomendado por el Instituto Nacional para la Salud y Seguridad Ocupacional (National Institute for Occupacional Safety and Health, NIOSH) (7). El plomo se compleja con pirrolidinditiocarbamato amónico (APDC) y el complejo formado, se extrae con metilisobutilcetona (MIBK). El plomo contenido en la fase orgánica se determina por Espectrofotometría de Absorción Atómica con llama, a una longitud de onda de 283,3 nm, utilizando un método directo de cuantificación.

Preparación de la muestra. Antes del análisis y una vez alcanzada la temperatura ambiente, la sangre se homogeneizó para luego pipetear 3 mL de sangre en tubos de ensayo de tapón roscado. Se añadió 0,8 mL de disolución de Triton X-100/ APDC y agitó mecánicamente durante 10 segundos. Posteriormente se añadieron 2 mL de MIBK se mezcló manualmente durante 2 minutos, invirtiendo los tubos a intervalos regulares. El complejo APDC-Pb en MIBK es poco estable por lo que el análisis debe efectuarse lo antes posible y en cualquier caso antes de las dos horas siguientes a la extracción del complejo. Se centrifugó a 3000 r.p.m. durante 10 minutos, repitiendo este paso si la operación si la separación de las fases orgánica y acuosa no es completaba. Del mismo modo se prepararon las disoluciones de trabajo de 0,4; 0,8; 1,0 y 1,2 µg Pb/mL. Seguidamente se preparó un blanco de agua bidestilada, sometido al mismo tratamiento que las muestras y patrones. La lectura obtenida para el blanco debe ser sustraída de las obtenidas para muestras y patrones (7).

Determinación de mercurio. Se realizó por espectrofotometría de absorción atómica de vapor frío, haciendo uso del método recomendado por NIOSH. A 4 mL de orina sin centrifugar se le agregaron 7 mL de HNO₃ al 65 % (Merck KGaA, Alemania). Luego de 5 minutos, se adicionaron 60 mL de agua desionizada y, para reducir el ion mercurio Hg²⁺ a su forma elemental e iniciar la emisión de vapores fríos (NIOSH 1994), se añadió 1 mL de solución de SnCl₂ al 20 % preparada a partir de SnCl₂·2H₂O ACS 98 % (Sigma-Aldrich Co., USA). La medición de absorbancia de las muestras a 253,7 nm (máxima absorción en la línea de resonancia del mercurio) fue realizada con un espectrofotómetro de vapor frío Bacharach® MAS-50B (8).

Determinación de creatinina. El análisis de creatinina por el método de Jaffe modificado se basa en hacer reaccionar la muestra con picrato de sodio, en medio alcalino, para formar un cromógeno rojo con un máximo de absorción a 510 nm (Jaffe 1886). Los resultados analíticos son frecuentemente expresados en microgramos de mercurio por cada gramo de creatinina. El método consiste en diluir la muestra de orina con agua destilada (1/100) hasta un volumen final de 5 mL. Se tomó una alícuota de 0,5 mL de muestra, se adicionaron 0,5 mL de agua destilada y 2 mL de picrato alcalino, este último reactivo fue preparado mezclando 20 mL de una solución acuosa saturada de ácido pícrico ACS 99 % (Merck KGaA, Alemania) y 4 mL de NaOH ACS 97 % (Sigma-Aldrich Co., USA) al 10 %. Se utilizó un espectrofotómetro de absorción atómica Millenium3® (9).