Judith del Campo
judithc@finlay.edu.cu
Rolando Ochoa
DACTA
Miriam Lastre
Gustavo Bracho
Carlos Taboada
Miriam Díaz
Oliver Pérez
Departamento de Inmunidad Básica y Clínica,DACTA,Instituto Finlay, la Habana, Cuba.
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Inmunología
ELISA Cualitativo de IgA anti-Lipopolisacárido de Vibrio cholerae en Saliva de Humanos
Fecha de recepción: 31/12/2000
Fecha de aceptación:
31/12/2000
Se estandarizó un ELISA para detectar, en saliva, IgA contra el lipopolisacárido, principal antígeno
protectogénico de Vibrio cholerae. Los voluntarios fueron inoculados por vía oral con dosis de 0,
107, 108, 109 unidades formadoras de colonias (ufc) del candidato vacunal El Tor Ogawa, cepa 638.
Las muestras de saliva fueron tomadas seriadamente, a los 0, 7, 8, 9, 10 y 14 días postinoculación.
Se consideró seroconversión si las densidades ópticas eran superiores al nivel de
corte y si los incrementos en cualquier tiempo después de la inoculación duplicaban los valores
iniciales. Los resultados del ELISA en saliva se compararon con: el ELISPOT, el Vobriocida y
además con los grupos experimentales. Se obtuvieron sensibilidades de 90.3, 92.85 y 93.3%;
especificidades de 86.9, 89.5 y 96.0%; 96.0%, valores predictivos positivos de 95.0, 96.2 y 98.2%,
98.2%; valores predictivos negativos de 77.0, 79.2 y 85.7% y eficiencias de 89.4, 90.2 y 94.1% ,
respectivamente. Se demostró la presencia de IgA anti LPS en saliva de los individuos inoculados
con el candidato vacunal, así como una mayor concentración con el inoculo (109 ufc) y se obtuvo la
máxima positividad a los 9 días.
Palabras Claves: Cólera; Saliva; Mucosa; IgA; ELISA.
Abstract
An ELISA technique for IgA antibodies again V. cholerae lipopolisaccharide (LPS) in saliva was
standardized. Humans volunteers were orally immunized with 0, 107, 108, 109 colony forming units
of the candidate vaccine strain 638, El Tor Ogawa. Saliva samples were collected at 0, 7, 8, 9, 10
and 14 days after oral administration. Seroconversion was considered if IgA titers determined by
optical density were higher than the cutoff value and if a two-fold increase of the initial titer was
found. The technique was compared to the ELISPOT and to the Vibriocidal Antibody Assay and
also the results obtained were compared to the experimental groups showing sensitivity of 90.3,
92.85, 93.3%; specificity of 86.9, 89.5, 96.0%; positive predictive value of 95.0, 96.2, 98.2%;
negative predictive value of 77.0 y 79.2, 85.7% and efficiency of 89.4, 90.2, 94.1% respectively.
The presence of specific IgA against LPS in saliva was demonstrated after immunization with the
vaccine candidate. The results showed a kinetic profile with a maximum of IgA titter at day 9 post
immunization with the highest frequency of positive titers found in the group immunized with 109 cfu.
Key Word
Cholera; Saliva; Mucose; IgA; ELISA.
Introducción
El cólera es una infección aguda del tracto gastrointestinal, causada por Vibrio cholerae, que se caracteriza, en los casos graves, por la aparición brusca de diarreas acuosas no sanguinolentas y abundantes, vómitos, deshidratación rápida (provocada por la pérdida de líquido), desequilibrio electrolítico, acidosis metabólica, hipopotasemia y colapso hipovolémico con insuficiencia cardíaca.
En los casos no tratados se produce la muerte dentro de las 24 horas de su aparición (1, 2). La infección se disemina a través de la vía fecal-oral (3).
Los mecanismos inmunes relacionados con el Cólera comprenden una inmunidad antitóxica y antibacteriana. Estas respuestas ocurren fundamentalmente a nivel de mucosa y son mediadas por anticuerpos de clase IgA el cual neutralizan la colonización intestinal, así como la unión de la subunidad B de la toxina colérica (CT) a su receptor específico (4,5). Se ha determinado que el lipopolisacárido (LPS) es el que induce mejor respuesta de anticuerpos y que estos se correlacionan con la protección (6). La IgA anti LPS puede prevenir la enfermedad por: aglutinación de Vibrio y atrapamiento en la mucosa, inhibición de su movilidad, prevenir la adherencia al epitelio y potenciar la acción antibacteriana de la lactoferrina y la lactoperoxidasa (6-9).
Por ser V. cholerae un microorganismo no invasivo, el cual genera una respuesta inmune a nivel de la mucosa intestinal y que la propia enfermedad confiere protección duradera, un preparado vacunal contra el Cólera debe ser oral, preferiblemente con una bacteria viva o que, en el proceso de producción, conserve en lo posible la estructura nativa (10,11). Recientemente, el Centro Nacional de Investigaciones Científicas y el Instituto Finlay obtuvieron un grupo de cepas atenuadas de V. cholerae delecionadas en el “cassette” de virulencia; entre ellas se encuentran cepas del biotipo El Tor serotipo Ogawa (12-14).
La protección en humanos de un candidato vacunal se realiza mediante el reto con Vibrio parentales no atenuados. No obstante, el vibriocida serico y el ELISPOT en sangre periférica son las técnicas más aceptadas para correlacionar con la inducción de una buena inmunogenicidad y protección. Éstas requieren la toma de muestras de sangre seriadas en el caso del vibriocida y gran volumen a los 7 días en el caso del ELISPOT. Además, el Vibricida mide la respuesta de IgG e IgM serica y no la IgA, que es la de más interés . Por su parte, el ELISPOT es una técnica costosa y, a pesar de medir IgA, es a nivel de sangre y no a nivel efector, mucoso. Por ello, nos propusimos la estandarización de un ELISA cualitativo en Saliva para determinar la inducción de IgA anti LPS Ogawa de V. cholerae en voluntarios inoculados por vía oral y valorar la aparición de IgA específica a nivel efector, así como estudiar el efecto de la dosis y cinética en la respuesta inducida.
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NOTA: Toda la información que se brinda en este artículo es de carácter investigativo y con fines académicos y de actualización para estudiantes y profesionales de la salud. En ningún caso es de carácter general ni sustituye el asesoramiento de un médico. Ante cualquier duda que pueda tener sobre su estado de salud, consulte con su médico o especialista. |
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