Aparatos y reactivos: El estroncio fue determinado en muestras óseas por Espectroscopia de Absorción Atómica (EAA) con llamas de óxido nitroso/acetileno, en un equipo Perkin-Elmer 3100 ²⁶ mientras que en sangre se determinó por EAA con atomización electrotérmica en un equipo Perkin-Elmer 4100. ^28-29 Todos los reactivos utilizados en este trabajo fueron del más alto grado analítico, excepto el ácido nítrico que fue Suprapurâ (65 %) de la Merck. Agua doblemente de-ionizada con resistividad especifica de 18 MW cm^-1, obtenida en un sistema Millipore Milli-Q Plus se usó para la preparación de todas las soluciones y para enjuagar el material de laboratorio. Se preparó un patrón de estroncio (1 g L^-1) disolviendo la cantidad apropiada de nitrato de estroncio anhidro (99 % de la Merck) en 500 ml de ácido nítrico 0.2 % (v/v). Diariamente se prepararon las soluciones de trabajo en el rango 0.0 a 20.0 mg L^-1 por diluciones sucesivas del patrón. Algunos compuestos químicos se probaron como posibles modificadores de matriz: nitratos de magnesio, lantano, nickel, talio y paladio y óxidos de samario, europio, terbio, holmio, erbio, tulio y lutecio. El nitrato de lantano al 0.4 % (p/v) se preparó al disolver la cantidad apropiada de la sal hexahidratada (La(NO₃)₂ . 6H₂O, 99 % de la Sigma) en agua, mientras que los demás nitratos solo se disuelven en ácido nítrico 0.2 % (v/v). Soluciones transparentes de los óxidos se han obtenido en ácido nítrico 1:1 bajo agitación ultrasónica por 20 min. Triton X-100, 0.1 % (v/v) preparado por dilución con agua del reactivo concentrado de la BDH se utilizó para diluir las muestras de sangre y evitar problemas experimentales asociados con la viscosidad de las muestras reales. Argón de alta pureza (99.99 % de AGA) se utilizó como gas de purga de los tubos de grafito. Para evitar contaminación exógena, los utensilios de laboratorio utilizados en la preparación de reactivos y muestras fueron rigurosamente lavados con ácido nítrico (10 %) y enjuagados copiosamente con agua antes de ser usados. En lo posible, se debe evitar el uso de material de vidrio, por lo que las muestras y las soluciones de trabajos se deben almacenar en envases de polietileno.

Muestreo y preparación de las muestras: Las muestras de sangre y huesos analizadas en este trabajo fueron suministradas por el Departamento de Traumatología de la Facultad de Medicina de la Universidad de Los Andes. Provienen de pacientes enfermos que por algún motivo consultaron o fueron intervenidos quirúrgicamente por presentar molestias o enfermedades óseas.

El muestreo (5 ml de sangre completa) se realizó por punción venosa del antebrazo en tubos ?vacutainer? heparinizados con tapas de polietileno. Después de mezclarlas suavemente por inversión, las muestras se guardaron bajo refrigeración (4 ºC) hasta el momento del análisis. Antes del análisis, las muestras fueron sacadas del refrigerador y dejadas para adquirir temperatura ambiente. Luego de homogeneizarlas en un vortex, las muestras de sangre se diluyen 1:20 con Triton X-100 0.1 % (v/v) Para efecto de optimización de parámetros instrumentales se preparó un pool de sangre combinando pequeños volúmenes de cada muestra independiente en un mismo envase.

Procedimiento general. El procedimiento está basado en atomizar electrotérmicamente el analito contenido en muestras depositadas sobre la pared del tubo pirolítico o sobre la plataforma integrada de los equipos PE-2100 y PE-4100ZL, respectivamente. La atomización sobre la pared se realiza inyectando 10 ml de la solución del modificador que contiene 12.8 mg de lantano, seguido de 10 ml de muestra diluida con Triton X-100 o de patrón que contiene 5 mg L^-1 de estroncio directamente en el tubo bajo las condiciones óptimas indicadas en el Equipo. No fue necesario usar modificador con la plataforma integrada. En cada caso las medidas se hicieron por triplicado; paralelamente se midieron blancos preparados igual que las muestras. Para evitar cambios en la sensibilidad debido al envejecimiento de los tubos, se compararon las pendientes de dos gráficos de calibración preparados uno al comienzo de cada experimento y otro al final. El tubo se reemplazó con uno nuevo cuando se encontró una diferencia significativa (p < 0.05) entre las dos pendientes.

Resultados y discusión:

El estudio involucró 17 sujetos, todos con valores promedios globales de edad y concentraciones de los elementos indicados en la Tabla 1. Para facilitar la interpretación del análisis estadístico, los sujetos bajo estudio, han sido clasificados según el siguiente criterio:

1. Por sexo en dos grupos: Femeninos (F) y Masculinos (M). (F =11 y M = 6).

El análisis estadístico de los resultados hace uso de los siguientes parámetros: media ± desviación estándar (DS), Coeficiente de variación (CV), desviación estándar relativa del error (DSE), Mínimo (Min), Máximo (Máx). Las concentraciones de los elementos [calcio (Ca), cobre (Cu), hierro (Fe), zinc (Zn) y magnesio (Mg)] están reportadas en mg g^-1 y mg mL^-1, para hueso y sangre respectivamente. La concentración de estroncio (Sr) esta reportada en mg g^-1 y mg L^-1 para hueso y sangre respectivamente.

Análisis estadístico descriptivo global: La estadística descriptiva global cuyos resultados se indican en la Tabla 1 muestra un promedio de edades de 68.64 ± 11.48 con un CV de 16.74 %, evidenciando poca variabilidad en la edad de los sujetos muestreados. Los niveles de los elementos estudiados para los sujetos Ca, Mg, Sr y Cu se encontraban por encima de los promedios normales reportados por la literatura. Sin diferencias significativa entre los sexos.

En la Tabla 1, se muestran las estadísticas descriptivas discriminadas por sexo. Cabe destacar que en este estudio, se restó importancia a la edad de los sujetos, por ser todos mayores de 45 años e incursos en la enfermedad estudiada. Además las edades se encuentran casi en su totalidad dentro de un mismo rango, con promedios 66.45 ± 11.95 y 72.60 ± 10.32 para el sexo femenino y masculino respectivamente.

Los pacientes mostraron niveles superiores en todos los elementos analizados, con diferencias altamente significativas, indistintamente del sexo y matriz (p < 0.01). Los resultados obtenidos, nos hacen pensar, que la artrosis es una enfermedad totalmente opuesta a la osteoporosis, donde ambos sexos, tienen igual susceptibilidad, a padecerla. Los altos niveles encontrados sobre todo para Ca, Mg y Sr, podrían explicarse, por la definición propia de la enfermedad: "remineralización ósea", específicamente en las zonas cartílago-articulación, produciendo la degeneración de esta última. Los elementos mas comprometidos con la enfermedad, no migran de sus depósitos óseos al torrente sanguíneo, sino que por el contrario se acumulan, presumiblemente intercambiándose internamente entre el cartílago y el hueso, hasta producir cristalización del cartílago y deformación de la articulación ³⁰. En las Figuras 2-7, se aprecia el comportamiento de los elementos analizados en ambos matrices biológicas, exceptuando el hierro, quien por la naturaleza de la muestra (sangre heparinizada) no fue posible su valoración.

Figura 2: Comportamiento de la variable Ca en hueso y sangre con respecto a la patología y el sexo.

V.N (0.093 mgg^-1)                                                         V.N (No reportado)  

 

 

Figura 3: Comportamiento de la variable Zn en hueso y sangre con respecto a la patología y el sexo.

 

 

V.N (3.39 mgg^-1) V.N (20-30 mgml^-1)

 

 

 

 

 Figura 5: Comportamiento de la variable Cu en hueso y sangre con respecto a la patología y el sexo.

 

Figura 6: Comportamiento de la variable Sr en hueso y sangre con respecto a la patología y el sexo.

 

 

Fig. 7 Comportamiento de la variable Fe en hueso con respecto a la patología y el sexo