Se utilizaron ratas machos de la variedad Sprague-Dawley, con un peso comprendido entre 250-300 gr. Las ratas fueron mantenidas en grupos de 4-5 animales, en jaulas metálicas, en ambiente con períodos de luz-oscuridad controlados de 12 horas c/u (6:00 am a 5:59 pm luz; 6:00 pm a 5:59 am oscuridad) a temperatura y humedad ambientales. Se les suministró agua y alimento ad libitum. Se utilizó solución de Uretano al 20% como anestésico general (1g/Kg; i.p.) y solución de Lidocaína al 2% como anestésico local. La zcSN fue abordada estereotáxicamente utilizando las coordenadas siguientes, obtenidas del atlas de Paxinos y Watson, 1982 ⁽³³⁾: AP= 5-5,5 mm; L = 1,5-2 mm; V = 6-7 mm. Se empleó un microelectrodo múltiple de vidrio (3-5 μm Ø) para el registro de la actividad eléctrica de las neuronas y para la aplicación microiontoforética del Cd²⁺ (CdCl₂, 0,25 mM; pH 7.4) y del estradiol (hemisuccinato de 17b-estradiol, 0,25 mM; pH 7.4) directamente en la zcSN. La actividad eléctrica de las neuronas de la zcSN se registró mediante técnicas electrofisiológicas convencionales, utilizando la barra central del microelectrodo de vidrio, la cual contenía una solución de azul de pontamina al 2% en acetato de sodio 0,5M y con una resistencia de 1-10 MΩ. En primera instancia, las espigas fueron identificadas como pertenecientes a la zcSN sobre la base de criterios electrofisiológicos previamente establecidos como: (1) forma y duración de la onda de cada potencial de acción, (2) frecuencia de descarga, y (3) patrón de descarga característicos de esta zona ^{(21, 22, 23)}. La actividad espontánea inicial de cada célula fue registrada de manera continua, por un período no menor de 20 minutos para comprobar su estabilidad, antes de proceder a aplicar pulsos de Cd²⁺ o de E₂ (40 nA x 5 min, c/u). Posterior a la aplicación, se registró la actividad hasta la recuperación. Los pulsos se aplicaron en orden aleatorio (primero el Cd²⁺ seguido de E₂ o viceversa). En dos células a las que previamente se les había probado el efecto del Cd²⁺ y del E₂ por separado, se procedió a aplicar de manera consecutiva los dos pulsos, con apenas 5 minutos de separación, comenzando con el de Cd²⁺ y posteriormente con el de E₂. En el presente estudio se consideraron como cambios significativos aquellas variaciones de la frecuencia de disparo de al menos un 50% de aumento (excitaciones) o de disminución (inhibiciones) en relación con la frecuencia promedio registrada durante el periodo inicial. Al finalizar cada registro, se procedió a marcar la zona haciendo pasar una corriente de 20 μA durante 20 minutos a través de la barra de registro llena con la solución de azul de Pontamina. El cerebro fue fijado prefundiendo al animal aún anestesiado con una solución de formol al 10 % por vía intracardíaca. Posteriormente, la ubicación exacta del sitio de registro de cada neurona fue corroborada histológicamente. Equivalente a la realización de una curva dosis-respuesta, en el presente trabajo se procedió a realizar una curva corriente-respuesta. Para ello, se aplicó el Cd²⁺ a las neuronas nigrales con pulsos de corriente de intensidad creciente, partiendo de 10 nA, hasta 200 nA, con incrementos progresivos de 10 nA. Los efectos significativos se observaron claramente a partir de 40 nA. Se decidió utilizar este valor de corriente para realizar el estudio sobre el efecto del Cd²⁺ en la actividad neuronal, por dos razones: (1) es el mismo valor de corriente al cual se han venido observado y estudiando los efectos del E₂ sobre las mismas neuronas, en estudios anteriores realizados en nuestro laboratorio y (2) se prefiere utilizar la mínima intensidad necesaria para observar los efectos, a los fines de minimizar los cambios producidos por la corriente propiamente dicha, sobre la excitabilidad neuronal.