Se solicitó permiso a la
Dirección de la Unidad Educativa, una vez otorgado
éste, se convocó a los representantes de los niños a una reunión en la cual se
les explicó el alcance y objetivo del estudio y se les hizo entrega del consentimiento
informado. A los hijos de aquellos representantes que aceptaron que sus hijos
participaran en el estudio y firmaron el consentimiento, se les realizó una observación
clínica para determinar las lesiones sospechosas a infecciones por dermatofitos,
quedando conformada la muestra por 35 niños en edades comprendidas entre 3 y 8 años
de ambos géneros que presentaran lesiones en piel, pelos y uñas. De los 35
niños seleccionados 25 eran del género masculino y los 10 restantes del género
femenino. Se tomaron muestras de toda
lesión sugestiva en piel que fuese una erupción de color
rosa o roja con formación o no de placas redondeadas con zonas claras en el
centro, en el cuero cabelludo se tomaron muestras de toda erupción roja
descamativa más bien pruriginosa, o si no placas de calvicie sin erupción,
mientras que las muestras de uña se tomaron aquellas que presentaron un color
amarillento y una ligera descamación. Para la obtención de la muestra en las lesiones en el cuero cabelludo se examinó la zona afectada
con la lámpara de Wood en busca de zonas fluorescentes que indicaran la
presencia de dermatofitos, los cuales producen una fluorescencia amarillo verdosa cuando
incide sobre él la luz ultravioleta filtrada a través de un cristal de Wood,
que ayuda a delimitar claramente los bordes activos de la lesión, luego se
procedió a desinfectar la zona con alcohol y a extraer cabellos cortos y
gruesos con una pinza estéril, se tomaron de 5 a
8 cabellos (9,10). Se realizó examen al fresco con KOH
al 10% a los pelos afectados, para observar el tipo de ataque (ecto o
endothrix). Además, parte de la muestra se sembró (cuatro tubos por cada una)
en el medio de agar lactritmel y se dejaron a temperatura ambiente con revisión
periódica cada 7 días por 3 semanas (11). Las muestras de piel se obtuvieron por raspados
de las lesiones con una hoja de bisturí
estéril, se colocaron las escamas obtenidas en placas de petri estériles. Parte
del material clínico se colocó entre una lámina
portaobjeto y cubreobjeto con una gota de la solución de KOH, para
permitir una mejor visualización (12), el resto de la
muestra obtenida se sembró en el medio de agar
lactritmel y se dejaron a temperatura ambiente con revisión periódica cada 7
días por 3 semanas (11). Para
la obtención de las muestras de uñas, se realizó limpieza previa cuidadosa de
las uñas con alcohol de 70 º, mediante la técnica de raspado con bisturí y
corte de las uñas con pinza gubia. Se hizo un raspado profundo partiendo del
extremo distal al proximal y recolectando el detrito subungueal de la
parte pigmentada, distrófica y más débil de la uña, obteniendo la muestraentre el límite de la región
sana y la infectada, y recogida en placas de petri estériles (9,10, 13). Parte del material se utilizó para
el examen directo al fresco con KOH al 20%, observándose al microscopio óptico con
objetivos de 10X y 40X, buscando la presencia de hifas hialinas, ramificadas y
septadas. El resto de la muestra fue sembrada en 4 tubos de agar Lactritmel (11)
y colocados a temperatura ambiente por 15 días, con revisión periódica cada 7
días. La identificación de las colonias se realizó por el aspecto macroscópico
y microscópico, siguiendo criterios descritos (11, 14, 15). Para la identificación
macroscópica de los hongos, se consideró el color de la superficie y reverso de la colonia,
textura de la superficie (pulverulenta, lanosa, algodonosa, granular, plegada),
diámetro alcanzado por la colonia y presencia de pigmentos (11,14-16). La
morfología microscópica de los hongos se realizó a través de un examen directo
del cultivo utilizando solución Azul de Lactofenol: en donde se empleó la técnica de Campbell (17),
seleccionando una colonia aislada, con la ayuda de un asa de siembra
esterilizada. Se depositó el fragmento extraído sobre un portaobjetos el cual
previamente contenía una gota de azul de Lactofenol, posteriormente se cubrió
con una lamina cubreobjetos presionándose suavemente para dispersar la colonia,
la muestra estuvo disponible para su observación al microscopio, usando el
objetivo de 40X (16). El método de Microcultivo consistió en
preparar una cámara húmeda estéril, usando para ello en una placa de Petri, en
el fondo de ésta se agregó agua estéril y dos varillas de vidrio que sostenía
el portaobjeto, el cual a su vez posee en su superficie el bloque de agar,
constituido por harina de maíz como ingrediente principal de la formula, que ha sido previamente cortado, usando un
bisturí. La muestra se inoculó sobre este bloque, en cuatro cuadrantes, haciendo
uso de una aguja bacteriológica forma de L. Sobre el bloque de agar ya
inoculado se colocó una laminilla cubreobjetos y se llevó a incubación al menos
por 7 días a 25 ºC.
Una vez terminado el periodo de incubación, se retiró el cubreobjetos y se
colocó en una lámina, añadiéndosele una o dos gotas de azul Lactofenol, para el
examen microscópico en objetivos de 10x y 40x observandose los micros y
macroconidias. Una vez recogidos los datos se aplicó estadística descriptiva y
se construyeron tablas de frecuencias y porcentajes.