En 530 personas, con diversos sí­ntomas, fue investigada la presencia de AVL, mediante el análisis de diversas muestras, incluyendo lentes de contacto o lí­quido de lavado para el cuidado de dichos lentes. Entre estas 530 personas, 273 presentaban sí­ntomas oftalmológicos, 30 sí­ntomas neurológicos, 79 eran usuarios de lentes de contacto, 61 pacientes tení­an rinitis, 30 diarrea, 3 otitis y 54 eran personas asintomáticas. De los 273 pacientes con sí­ntomas oftalmológicos, 236 tení­an UC unilateral y dos de ellos presentaban úlcera bilateral, por lo cual se examinaron un total de 238 muestras de este tipo de lesión. Además, se examinó muestras a 2 pacientes con queratitis y a 31 pacientes con conjuntivitis crónica que no respondí­an a los tratamientos usuales. También fueron analizadas 2 corneas recién extraí­das, que fueron remitidas al laboratorio, posterior a un procedimiento quirúrgico. De los 30 pacientes con sí­ntomas neurológicos, se examinó el LCR a 28 ellos y material de biopsia cerebral en 2 pacientes.

A 79 usuarios de lentes de contacto, se le estudiaron sus lentes y/o los lí­quidos de lavado, 49 presentaban sí­ntomas que iban desde prurito y ardor hasta UC y 30 eran asintomáticos.

En resumen, se examinaron muestras de LCR, muestras de úlcera corneal, cornea, hisopado conjuntival, lí­quido de lavado de lentes de contacto, lentes de contacto, biopsia cerebral, hisopados nasales, heces y secreción ótica.

Todos los aspectos relacionados con esta investigación se realizaron ajustados a las normas y procedimientos bioéticos que rigen la investigación en humanos, garantizando la confidencialidad en el manejo de los datos personales de los individuos. Asegurando la comprensión del procedimiento a seguir y el riesgo-beneficio, para obtener su consentimiento.

Muestras: toma, transporte y procesamiento. Las muestras fueron tomadas en los servicios médicos especializados, dependiendo de la sintomatologí­a del paciente y algunas en el Laboratorio de Amibiasis, como los hisopados nasales y de fondo de saco del ojo, lentes y solución de lavado. Una vez tomadas, fueron trasladadas, en cámara húmeda y medios de transporte al Laboratorio de Amibiasis, para la investigación parasitológica y a los laboratorios de Micologí­a y Bacteriologí­a.

El procesamiento de las muestras, se realizó en general, mediante examen microscópico directo (entre lámina y laminilla), añadiendo una gota de medio lí­quido, de Page modificado por Chinchilla y cols. (1979) ⁽¹⁴⁾, que llamaremos medio de Chinchilla lí­quido, si la muestra lo ameritaba. Cultivo en placas con medio de sólido, (al medio lí­quido le añadimos la cantidad de agar, recomendada por Chinchilla y cols.). A dicha placa, una vez colocada la muestra, se le añadí­a 0,5 ml de suspensión de Escherichia coli, vivas o muertas, ajustada a 27% de turbidez, 36% de transmitancia y 0,56-0,45 de absorbancia (concentración ajustada al patrón Mac Farland). El cultivo se completaba hasta 8-10 ml, con medio de cultivo de Chinchilla lí­quido, transformándose en un cultivo bifásico. Se incubaron, los cultivos, hasta por 8 dí­as, a 37ºC y 42ºC, realizando observaciones diarias, con microscopio invertido. En el lugar de la toma de la muestra se realizaron controles de ambiente, con placas de medio de Chinchilla las cuales fueron abiertas y mantenidas mientras se tomaba la muestra y se procesaron en idéntica forma que las que contení­an las muestras.

Prueba de flagelación: Se colocaron 2-3 gotas del lí­quido en un tubo de ensayo, con 2-3 ml de agua destilada estéril, se incubó a 37 ºC y 42 ºC hasta por 8 dí­as. La evaluación microscópica se hizo tomando alí­cuotas, para observar entre lámina y laminilla.

A partir de los cultivos positivos, la prueba se realizó de dos maneras:

a) El material que se recogió de la placa con crecimiento fue colocado en una placa de Petri vací­a y estéril, se le añadió 10 ml de agua destilada estéril. Se incubó a 37 ºC y 42 ºC, observando al microscopio invertido, cada media hora o hasta observar los flagelados. También se examinó microscópicamente entre lámina y laminilla.

b) En la placa de cultivo donde se observó trofozoí­tos ameboides, se le retiró el medio lí­quido, sin desprender las amibas y se añadió 10 ml de agua destilada estéril y se continuó en igual forma que en el procedimiento anterior.

Estas muestras fueron tomadas por un oftalmólogo, previa anestesia tópica con clorhidrato de proparacaina al 0,5%, utilizando el microscopio de la lámpara de hendidura, para identificar los bordes de la lesión, de los cuales se tomaron varias muestras utilizando un bisturí­ Nº 15, raspando la lesión, y se procesaron de la siguiente manera: Un primer raspado, se colocó entre lámina y laminilla con una gota de medio lí­quido y se transportó en cámara húmeda al Laboratorio, donde se realizó el examen microscópico directo. El segundo raspado se colocó en un frasco estéril con tapa de goma con 2,5 ml de medio lí­quido de Chinchilla estéril, para transportarlo al laboratorio. Al llegar al Laboratorio se colocó el contenido del segundo frasco en dos placas de medio de Chinchilla sólido, se añadió la suspensión bacteriana y hasta 8 ml de medio lí­quido de Chinchilla y se incubó a 37ºC. También se tomaron muestras por triplicado con hisopo estéril, para investigación micológica y bacteriológica, para lo cual se sembraron en medio de Saboureaud y Caldo Todd y fueron procesadas en los laboratorios de Microbiologí­a y Micologí­a.

Esta muestra fue tomada por un oftalmólogo y enviada al laboratorio. Una vez allí­, la muestra se fragmentó a fin de sembrar varias placas y aumentar las posibilidades del hallazgo de Acanthamoeba. Cada fragmento se cultivó y se procedió igual que para la muestra de UC.

Se tomaron muestras del fondo de saco conjuntival con hisopos estériles, se realizó examen microscópico directo y cultivo en los medios de Chinchilla lí­quido, Saboureaud y Caldo Todd. Los hisopos con la muestra se colocaron en frascos con 2,5 ml de medio lí­quido de Chinchilla y se procedió igual que para la muestra de UC. El material conjuntival recogido con uno de los hisopos se colocó en una lámina, para observación microscópica entre lámina y laminilla.

Se examinaron los lentes al microscopio invertido, colocándolos en una placa de Petri estéril. Posteriormente se pasaron a una placa con medio de Chinchilla sólido y se añadió 1 ml de medio lí­quido de Chinchilla, suficiente para cubrirlos y se incubaron a 37ºC por un máximo de 10 minutos, al cabo de los cuales, se retiraron los lentes y se colocaron en Caldo Todd, por 10 minutos. A la placa donde estuvieron los lentes, se le añadió medio de cultivo de Chinchilla lí­quido y suspensión bacteriana y se procesaron como se explicó para las muestras anteriores.

Se tomaron muestras tanto de la solución usada, contenida en el estuche donde se guardaban los lentes, como la no usada de los frascos que llevó el paciente. Cada solución se procesó tal y como se describió anteriormente, para la investigación de AVL, hongos y bacterias.

Se seleccionaron personas sin ningún tipo de sintomatologí­a, que accedieron voluntariamente a participar en el estudio.  Se tomaron hisopados de cada fosa nasal y se realizó exudado farí­ngeo, estas muestras fueron procesadas tal como se describió anteriormente para las muestras tomadas con hisopos, tanto para la investigación de AVL, como para la de hongos y bacterias.

En este estudio descriptivo, los datos fueron expresados a manera de porcentajes. La prueba de chi cuadrado se usó para comparar las variables. Las diferencias presentadas con una p≤ a 0,05 fueron consideradas estadí­sticamente significativas.