Parasitología
Hallazgos de Amibas de Vida Libre de los géneros Acanthamoeba y Naegleria. Una experiencia venezolana.
Resultados
Mediante la metodología descrita, se observaron amibas de los géneros Acanthamoeba y Naegleria, en 32 casos, lo que representa el 6% de todas las muestras estudiadas (n = 530). El hallazgo de amibas de los géneros Acanthamoeba y Naegleria de acuerdo a la procedencia de la muestra se describe en la tabla 1.
Tabla 1.
Amibas de los géneros Acanthamoeba y Naegleria halladas en las diferentes muestras examinadas. (n = 32)
Entre las 273 muestras de pacientes con afecciones oculares, se encontró Acanthamoeba sp en 18 casos (6,6%), que se presentan en la tabla 2.
Tabla 2.
Hallazgo de Acanthamoeba sp en muestras provenientes de pacientes con síntomas oculares. (n = 18).
De los 79 usuarios de lentes de contacto examinados, en 14 se detectaron amibas del género Acanthamoeba lo que equivale al 17,7% de las muestras examinadas, en lentes y/o líquidos usados para su cuidado. Entre estos 14 usuarios de lentes de contacto donde se encontró Acanthamoeba sp, 10 de ellos presentaban UC, 2 tenían conjuntivitis, uno tenía prurito y ardor y uno era asintomático. De los pacientes usuarios de lentes de contacto que presentaban UC, a los cuales se les aisló Acanthamoeba sp, en 3 de ellos se evidenció la amiba proveniente únicamente de la lesión y solo en 2, de los lentes y líquidos usados para su cuidado (tabla 3).
Tabla 3.
Usuarios de lentes de contacto a los cuales se les encontró Acanthamoeba sp. Se indica el cuadro clínico y la proveniencia de la muestra.
De los 30 pacientes con síntomas neurológicos, se encontró Naegleria sp en el LCR de 2 pacientes. En ambos casos los pacientes habían tenido contacto con colecciones de agua dulce por lo menos una semana antes de comenzar los síntomas. El primer caso, un paciente de 54 años con diagnóstico de meningoencefalitis, quien una semana antes de aparecer los síntomas, se había lavado la nariz con agua de una manguera, conectada a un tanque de almacenamiento de agua en horas del mediodía. El segundo caso, una niña de 8 años quien 7 días antes se bañó en Pozo de Rosas ubicado en el Parque Henry Pittier, Estado Aragua. En ambos casos, se confirmó Naegleria fowleri, mediante la técnica de PCR estandarizada en el Laboratorio de Amibiasis (datos no publicados).
Se encontró un caso de Acanthamoeba sp al examinar una muestra obtenida a partir de una biopsia cerebral en un paciente de 44 años de edad, inmunosuprimido con un adenocarcinoma metastásico de probable origen pulmonar (tabla 1). Entre los pacientes con rinitis, se observó un caso cuyo único antecedente era presentar rinitis a repetición y se evidenciaron trofozoítos ameboides diferentes a Acanthamoeba sp y Naegleria sp. Trofozoítos similares se encontraron en un niño con otitis.
Los resultados de acuerdo a la metodología empleada para la investigación de AVL, se presentan en la tabla 4.
Tabla 4.
Métodos usados para observar las amibas de vida libre; según su procedencia.
(n = 32)
Todas las amibas encontradas
pertenecían al género Acanthamoeba,
excepto las encontradas en el LCR, que se identificaron como Naegleria fowleri. líq. = líquido
contenido en la cajita donde se guardan los lentes.
En las 32 muestras en las cuales se observó Acanthamoeba o Naegleria, el hallazgo en 22 de ellas, se realizó en el cultivo y en 10 por examen directo y cultivo. La comparación mediante el método de chi cuadrado, (p < 0,05) demostró que el cultivo es el mejor método para el hallazgo de AVL, resultando estadísticamente significativo.
Características morfológicas de las amibas encontradas.
Acanthamoeba: La morfología observada a partir de los cultivos se muestra en las figs (1a-1b) (video 1) donde se observan trofozoitos, en los cuales se distingue la vacuola contráctil, núcleo y los acanthopodios.
Figura 1.: Trofozoitos de Acanthamoeba sp. en cultivo, aumento: 1000X
Figura 2.: a-d: quistes de Acanthamoeba sp. en cultivo. Aumento 1000X
Quistes en las figs (2a-d ). Se observó el ectoquiste generalmente grueso y arrugado, endoquiste estrellado, poligonal, triangular, a veces redondeado, los puntos de unión entre endo y ectoquiste, se observaron en todos los aislados, en diferente plano, excepto en el aislado procedente del líquido de lavado de lente de contacto, en el cual se observaron todos los puntos, en el mismo plano. (fig 2a). A partir de los exámenes directos de diferentes muestras como biopsia cerebral (Fig.3) y UC, en las cuales se observó endoquiste y el ectoquiste a menor aumento como una zona clara, y lo plegado o festoneado del mismo a mayor aumento (Fig.4).
Figura 3.: Quiste de Acanthamoeba sp. en cultivo obtenido de una biopsia cerebral. Aumento 1000X
Figura 4.: Quistes de Acanthamoeba sp. en raspado de úlcera corneal. a = 450X , b = 1000X.
El examen microscópico directo de los lentes a menor aumento con microscopio invertido, demostró la presencia de los quistes, distinguiéndose la forma geométrica del endoquiste y su refringencia ( Fig. 5) y más claramente a un aumento mayor (Fig. 6). En el líquido contenido en la cajita donde se guardan los lentes, se observó quistes aislados o combinados con el detritus observado, evidenciándose la forma del endoquiste (Fig. 7).
Figura 5.: Quiste de Acanthamoeba sp. en un lente de contacto observado al microscopio invertido. Aumento = 100X.
Figura 6.: Quistes de Acanthamoeba sp. en un lente de contacto observado al microscopio invertido. Aumento = 250X.
Figura 7.: Quistes de Acanthamoeba sp. en examen directo del líquido contenido en el recipiente para lentes de contacto. Aumento = 450X
Naegleria fowleri: A partir del LCR los trofozoítos ameboides, que midieron un promedio de 10 mm, se observaron emitiendo pseudópodos los cuales no producían un franco desplazamiento, sin evidencia de núcleo o vacuola contráctil (Fig 8).
Figura 8.: Trofozoítos ameboides de Naegleria sp. Examen directo de líquido cefaloraquídeo, secuencia de movimientos. Aumento = 450X.
A partir de los cultivos midieron un promedio de 12 mm, se observó claramente el endoplasma y ectoplasma. Durante el movimiento, el endoplasma, parece vaciarse en el ectoplasma, evidenciándose el núcleo, que jamás pasa al ectoplasma. El núcleo presentaba un gran cariosoma, rodeado de un halo claro y una vacuola contráctil que midió 2 mm de diámetro, la cual se abría y cerraba a intervalos determinados de 2 segundos (Figs. 9-10), (Video 2).
Figura 9.: Trofozoíto ameboide de Naegleria sp. en cultivo. Aumento 450X.
Figura 10.: Trofozoíto ameboide de Naegleria sp. en cultivo. Aumento 1000X
Los quistes (Fig.11), observados a partir de los cultivos tenían un promedio de 10m m de diámetro, con un núcleo muy evidente. No se observan poros pero, después del desenquistamiento se puede ver claramente por donde salió la amiba (Fig.12).
Figura 11.: Quiste de Naegleria sp. en cultivo. Aumento 1000X.
Figura 12.: Pared de un quiste de Naegleria sp. en cultivo, con poro abierto luego del desenquistamiento. Aumento 1000X.
Los trofozoítos flagelados, fueron observados al inducir el proceso de flagelación y después de media hora de la resiembra de un medio a otro. Al colocarlos entre lámina y laminilla, pudimos ver su forma alargada, pero puede verse redondeadas, presentando dos flagelos. No se evidenció el núcleo ni la vacuola contráctil. Miden aproximadamente 10 mm (Fig.13a-13b).
Figura 13.: Trofozoítos flagelados de Naegleria sp. obtenidos experimentalmente.
a = 450X; b = 1000X.
Los aislados de Naegleria, mantenidos en cultivo, desde hace más de 10 años, continúan flagelando al proporcionar las condiciones adecuadas. Aproximadamente a partir de las cuatro horas hay flagelados, alargados y desplazándose rápidamente en el campo (Video 3), se han observado etapas de transición entre la forma ameboide y flagelada. (Fig. 14).En estos trofozoítos ameboides los flagelos desaparecen tan rápidamente que es difícil de describir el proceso en el cual desaparecen dichos flagelos, los cuales parecen ser internalizados dentro del citoplasma.
Figura 14.: Trofozoíto amebo-flagelado de Naegleria sp. obtenido experimentalmente. Aumento = 450X |
