Bioanálisis
Hibiscus sabdariff L. Una Comparación de compuestos fenólicos totales y flavonoides en cálices y hoja.
Materiales y métodos
Material vegetal El material vegetal (cálices) fue obtenido de dos mercados populares de la ciudad de Caracas Distrito Capital, Venezuela. Las hojas fueron donadas por agricultores independientes. Extracción Para la obtención de los extractos se procedió a pesar 6 g de material vegetal (cálices y hojas), colocándolos en un vaso precipitado de 400 mL con 320 mL de agua a 90°C durante 10 minutos con agitación constante. Los extractos se filtraron, se secaron por liofilización y se redisolvieron a una disolución madre estandarizada de 1 mg/mL con base en su peso seco8. Cuantificación de compuestos fenólicos totales (polifenoles) La determinación de fenoles se realizó por el método colorimétrico de Follin-Ciocalteu. A 50 µL de muestra fueron adicionados a 125 µL del reactivo de Folin, y 400 uL de carbonato de Sodio 7,1% (p/v), completándose con agua destilada hasta 1000 µL. Este procedimiento se realizó por quintuplicado. Seguidamente se prepararon 5 patrones de concentración de 50, 100,150, 200 y 250 µg/mL, a partir de una solución patrón madre de Ácido Gálico (fenol) de concentración 500 µg/mL. Por último realizó la lectura a 760 nm empleando el equipo de absorción molecular Génesis 20 (Thermo Scintific), y expresando los resultados como mg de GAE / g de material vegetal9. Determinación de flavonoides La determinación de flavonoides se realizó siguiendo un método colorimétrico. 100 uL de muestra fueron mezclados con 30 uL de NaNO2 al5% (p/v), 30 uL de AlCl3 10 % (p/v), 200 uL de NaOH a 1M y ajustados con agua destilada hasta un volumen final de 1000 uL, se realizó la lectura espectrofotométrica a 510 nm y se comparó con la curva patrón usando como estándar (+)-catequina. Los resultados fueron expresados como mg de Catequina Equivalente / g de material vegetal 10. Análisis estadístico Todas las determinaciones se realizaron por quintuplicados y se expresaron los valores como los promedios ± desviación estándar (DE). Para la comparación de la concentración tanto de fenoles totales como de flavonoides en cálices y hojas se aplicó un análisis de varianza de dos vías con interacción (ANOVA), usando el programa Statistix 9.0 para Windows. |
