Las muestras de donde se aislaron las cepas de las especies bacterianas fueron: Hemocultivo, orina, esputo, aspirado traqueal, aspirado bronquial, absceso, exudado ótico, secreción nasal y exudado vaginal (Tabla 1).

Identificación de las bacterias por caracterí­sticas fenotí­picas convencionales.

Las cepas de cada una de las especies bacterianas fueron identificadas por los resultados siguientes:

- Klebsiella pneumoniae: Bacilos Gram-negativos, formadores de colonias mucosas, grandes que utilizaron los sustratos urea, lisina, citrato, glucosa, lactosa, sucrosa, carentes de motilidad y de producción de indol ⁽²⁴⁾.

_ Staphylococcus aureus: Cocos Gram-positivos principalmente en forma de racimos, formadores de colonias medianas con pigmento amarillo-anaranjado y metabolismo fermentativo-oxidativo. Positivos en las reacciones enzimáticas de catalasa, DNAsa, estafilocoagulasa y fosfatasa alcalina. Resistentes a la polimixina B y sensibles a la novobiocina ⁽²⁵⁾.

- Streptococcus agalactiae: Cocos Gram-positivos en cadenas, formadores de colonias pequeñas, translúcidas con un pequeño halo de β- hemolisis, carentes de la enzima catalasa, con capacidad para hidrolizar el hipurato y productor de la proteí­na extracelular difusible o factor CAMP ⁽²⁶⁾.

Espectros por Resonancia Magnética Nuclear protónica (⁺HRMN).

Procesamiento de los datos.

Los espectros en una sola dimensión fueron adquiridos a través del programa TOPSPIN versión 1,3. Posteriormente fueron procesados mediante el programa MatNMR V.3.90 que funciona bajo Matlab The MathWorks Inc, versión v. 7.5.0.342 (R2007b).

Para el análisis de los espectros de resonancia magnética nuclear se utilizó el programa matNMR v. 2.7, software de distribución libre, desarrollado por Jacco van Beek ⁽²⁸⁾, utilizando el ambiente MATLAB ^® The MathWorksâ„¢ Inc, versión v. 7.5.0.342 (R2007b), el cual permite el procesamiento de espectros de 1 y 2 dimensiones, ajuste de picos espectrales, ajuste de T₁ y permite además un despliegue gráfico adecuado para la comparación de los espectros.

Asignación de la señal

El procedimiento para establecer una comparación de los espectros fue el siguiente: Se tomó como referencia común el pico correspondiente al agua (4,6 ppm) y en base a esto, se transforman los espectros para las diferentes muestras a fin de tener la mayorí­a de los picos comunes alineados. Seguidamente, cada espectro corregido fue guardado y posteriormente se obtuvo el promedio de 10 cepas para cada una de las especies bacterianas. Una vez normalizados los espectros se realizaron las comparaciones correspondientes entre las especies ⁽²⁸⁾.

Los espectros ⁺HRMN de cada uno de los cultivos bacterianos, así­ como los del caldo infusión-cerebro-corazón (CICC), se obtuvieron en las regiones de 0 a 10 ppm. Los espectros se recortaron para facilitar la observación de las similitudes y diferencias entre las señales. De ellas, se destacaron principalmente las que contribuyen en la diferenciación de las bacterias entre si y del medio de cultivo.

La figura 1, muestra la ventana desde 0,5 ppm hasta 2,7 ppm de la región alifática de los espectros ⁺HRMN promedio de 10 cepas de cada una de las especies bacterianas en cultivo, así­ como el del CICC. En el punto A(1) del espectro de los cultivos de S. agalactiae, destacan señales con desplazamiento quí­mico de 0,98; 1,00; 1,01; 1,04 y 1,06 ppm, con intensidades de 0,00018; 0,00011; 0,00026; 0,00039 y 0,00031 respectivamente. En el punto B(1) del espectro de los cultivos de S. aureus, se destacan señales con desplazamiento quí­mico de:0,97; 0,99; 1,01; 1,03; 1,06 ppm con intensidades de 0,00026; 0,00032; 0,0006; 0,00105 y 0,00074 respectivamente. En el punto C(1) del espectro de los cultivos de K. pneumoniae, se destacan cuatro señales de:0,98; 1,00; 1,03; 1,05 ppm, con intensidades de 0,00161; 0,00166; 0,00163 y 0,00095 respectivamente. En el punto D(1), del espectro del caldo infusión cerebro-corazón no se observan señales.

En el punto B(2) de esta misma figura, aparece una señal de 2,27 ppm con 0,00053 de intensidad. En C(2) aparece una señal de 2,27 ppm con intensidad 0,00221. En A(2) y D(2), no aparece esta señal.

La figura 2, muestra la ventana desde 2,7 ppm hasta 4,0 ppm de la región alifática, de los espectros ⁺HRMN promedio de 10 cepas de cada una de las especies bacterianas, así­ como el del CICC. En ella se observa que en el punto A (1), correspondiente al espectro de los cultivos de S. agalactiae aparece 1 señal de 3,08 ppm con intensidad de 0,00035 ppm. En C (1) correspondiente al espectro de los cultivos de K. pneumoniae se destaca una señal en 3,08 ppm con 0,00033 de intensidad, la cual no aparece en B(1) ni en D(1). En A(2) se evidencian dos señales de 3,50 y 3,52 ppm con intensidades de 0,00054 y 0,00065. En B(2) destacan dos señales de 3,50 y 3,52 ppm con intensidades de 0,0011 y 0,0012. En C(2), aparecen señales de 3,51 y 3,53 ppm, con intensidades de 0,00092 y 0,00095 respectivamente. En D(2) no se observan estas señales.

En el punto A(3), se destacan 4 señales: 3,92; 3,94; 3,96 y 3,99 ppm con intensidades de 0,00115; 0,00104; 0,00168 y 0,00173 respectivamente. En B(3), se observan 4 señales: 3,91; 3,94; 3,96 y 3,98 ppm, con intensidades de 0,0005; 0,00082; 0,00147 y 0,00155 respectivamente. En C(3) ni en D(3) se observan estas señales.

La figura 3, muestra la ventana desde 6,5 hasta 9,0 ppm de la región aromática, de los espectros ⁺HRMN promedio de 10 cepas de cada una de las especies bacterianas, así­ como el del CICC. En ella se observa en el punto 1 de los 4 espectros una señal con desplazamiento quí­mico de 8,35 ppm e intensidades de 0,03447 (A), 0,0180 (B), 0,010 (C) y 0,00276 (D). En esta ventana las señales son escasas.