Las bandas de migración electroforética de las muestras de proteínas obtenidas de cada ADM: izquierda (I) o derecha (D) de cada condición: control (c), inflamado (i) o inflamado y pretratado con indometacina (t) de animales, así como una muestra de calibración de pesos moleculares referenciales, se presentan en la figura 1. A pesar de que la corrida electroforética no fue
totalmente homogénea, se puede observar como en Ic y Dc se revelaron 4 bandas ubicadas entre 250-120KDa y 3 bandas ubicadas entre 84-28KDa; en Ii se revelaron 5 bandas entre 250-120KDa y 3 bandas entre 84-28KDa. En Di e
It se revelaron 7 bandas entre 250-120KDa y 3 bandas ubicadas entre 84-28KDa; por el contrario, en Dt se observaron 5 bandas por encima de 215 KDa y 4 bandas entre 84-28 KDa.
Figura 1: Electroforesis
de
proteínas
totales
de
las
ADM
de
las
ratas
controles
y
de
los
grupos
A
y
B.
Marcador
de
pesos
moleculares
(M),
con
sus
respectivas
bandas
(215,
120,
84,
60,
39.2
y
28KDa); muestras
del
ADM
ipsilateral
(Ic)
o
contralateral
(Dc)
de
ratas
no
inflamadas
o
controles;
muestra
del
ADM
ipsilateral
(Ii)
o
contralateral
(Di),
posterior
a
la
inflamación;
muestra
del
ADM
ipsilateral
(It)
o
contralateral
(Dt),
posterior
a
la
inflamación
y
pretratadas
con
indometacina.
Expresión de proteínas en las ADM
En
la
figura
2
se
observan
los
cambios
de
la
expresión
proteica
en
el
ADM
ipsilateral
a
la
inflamación.
El
proceso
inflamatorio
indujo
un
incremento
generalizado
de
las
mismas de +39,82%, en relación con el grupo control, manteniéndose los picos en los
PM
predominantes,
pero
más
intensamente
en
las
proteínas
de
PM>200.
Llama
la
atención
que
el
pretratamiento
con
indometacina,
no
solo
produjo
disminución
de
la
expresión
de
las
proteínas
postinflamación
(-33,57%), sino que además inhibió las proteínas constitutivamente
expresadas
en
el
grupo
control,
siendo
este
efecto
más
intenso
para
proteínas
de
PM<350. Por
el
contrario,
en
el
ADM
contralateral,
el
proceso
inflamatorio
redujo
la
expresión
de
proteínas
totales
en
-15%,
suprimió
las
proteínas
que
estaban
presentes
en
el
grupo
control
en
los
picos
de
PM
160-320KDa,
suprimió
la
expresión
constitutiva
de
proteínas
con
PM
de
20-80KDa
e
incrementó
la
expresión
de
aquellas
con
PM
≥450KDa.
La
administración
de
indometacina
favoreció
el
incremento
de
la
expresión
protéica de bajo
PM
(20-80KDa),
mientras
que
en
el
resto
de
la
curva
se
evidenció
un
incremento
de
la
expresión
en
comparación al grupo inflamado e inclusive, un aumento en la densidad proteica total de +14,2% con respecto del grupo control
(Figura
3).
Figura 2: Diferencias en la expresión de proteínas totales de las ADM ipsilaterales a la inflamación periférica de todos los grupos experimentales (Ic, Ii, It). n=5; PM= peso molecular; MA= average móvil de 10 términos.
Figura 3: Diferencias en la expresión de proteínas totales de las ADM contralaterales a la inflamación periférica de todos los grupos experimentales (Dc, Di, Dt). n=5; PM= peso molecular; MA= average móvil de 10 términos.
Expresión de proteínas de las ADM en condiciones controles
La diferencia de proteínas en el grupo control (Dc-Ic) muestra una mayor expresión de las mismas en las ADM contralaterales con PM entre 260-340KDa (Figura 4). A pesar de la magnitud de la expresión proteica hallada, esta no fue significativa.
Figura 4: Diferencias en la expresión de proteínas totales entre las ADM ipsi y contralaterales de ratas controles (Dc-Ic) expresadas como unidades densitométricas relativas (%ud), n=5; niveles de confiabilidad P5 y P95. PM: peso molecular; MA: average móvil de 10 términos.
Expresión de proteínas de las ADM en condiciones de inflamación periférica unilateral
El proceso inflamatorio incrementó la expresión de proteínas con PM de 180-260KDa del ADM ipsilateral. Por el contrario, en el ADM contralateral aumentaron las proteínas con PM comprendidos entre 580-640KDa (Figura 5).
Figura 5: Diferencias en la expresión de proteínas totales entre las ADM ipsi y contralaterales en las ratas del grupo A (Di-Ii) expresadas como unidades densitométricas relativas (%ud), n=5; niveles de confiabilidad P5 y P95. PM: peso molecular; MA: average móvil de 10 términos.
Expresión de proteínas de las ADM en condiciones de inflamación periférica unilateral pretratadas con indometacina
En
el
grupo
B,
se
registró
una
inhibición
a
nivel
del
ADM
ipsilateral,
de
la
expresión
de
proteínas
con
PM≥720KDa. Por el contrario,
la
expresión
de
las
mismas
en
el
ADM
contralateral
aumentó,
particularmente
en
dos
bandas
de
proteínas
con
PM
4
a
8KDa
y
de
340
a
360KDa
(Figura
6).
Figura 6: Diferencias en la expresión de proteínas totales de las ADM ipsi y contralaterales previo tratamiento con indometacina (Dt-It) expresadas como unidades densitométricas relativas (%ud), n=5; niveles de confiabilidad P5 y P95. PM: peso molecular; MA: average móvil de 10 términos.
Expresión de proteínas del canal Nav1.3 en las ADM
De acuerdo a los niveles de especificidad del Western blot y bajo las condiciones experimentales descritas, no se observó la presencia de bandas reactivas que sugirieran la expresión del canal Nav1.3.