Se trabajó entonces con varios aislamientos de P. brasiliensis provenientes de pacientes con PCM, en un sistema de microcultivos preparados en medios pobres (agar agua, dextrosa sales), en los cuales se intentó seguir, paso a paso, el desarrollo y esporulación de los micelios. Se observó así cómo en algunos aislamientos del hongo - y luego de 8 semanas de incubación a 20-22º C - aparecían microconidias pedunculadas y artroconidias tálicas intercalares, algunas de las cuales daban lugar a un abultamiento lateral que resultaba en otra conidia (Fig. 1). Todas las conidias eran pequeñas y medían menos de 5 µm; estas observaciones permitieron comprobar las varias formas, el tamaño y la relación con el micelio parental de las conidias (24).

A pesar del avance anterior, para caracterizar las conidias era indispensable individualizarlas, separándolas del micelio que las originaba. Después de múltiples intentos se logró separarlas del micelio a partir de cultivos hechos en caja de Petri utilizando los medios pobres en nutrientes ya mencionados e incubando por 2-3 meses a temperaturas menores a 20 º C (25) (Fig. 2). Bajo estas condiciones, era posible obtener por caja de Petri hasta un millón de conidias, 80% de las cuales se mostraban viables después de separadas (25).

En este momento, era posible trabajar con las conidias como unidades independientes. Puesto que era necesario conocer si poseían o no el dimorfismo térmico, se exploró la posible influencia de la temperatura sobre las conidias. Para ello se retornó a los microcultivos, sembrándolos con conidias e incubándolos separadamente tanto a 20-22º C como a 36º C, haciendo observaciones periódicas. A 20-22º C las conidias empezaban a emitir tubos germinales antes de las 24 horas y a las 96 horas, presentaban ya micelios septados y ramificados. Al incubar a 36º C las conidias adquirían inicialmente un aspecto redondeado para dar lugar, 132 horas después, a las levaduras con gemación múltiple (aproximadamente 40 µm diámetro) características de P. brasiliensis (Fig. 3) (26).

A pesar de su pequeño tamaño (menos de 5 µm), las conidias presentaban el dimorfismo térmico convirtiéndose, al elevar la temperatura a 36º C, en células levaduras 9-10 veces mayores que ellas. Pero también eran igualmente capaces de emitir micelios al ser incubadas a temperaturas más bajas (20-22º C) (26). En otro contexto, los resultados anteriores revelaron que la conidia de P. brasiliensis es una estructura inestable, de transición y como tal, incapaz de mantenerse indefinidamente bajo esta forma; la influencia de la temperatura determina si se hace micelio o levadura.

Como era conocido, ya que tanto el micelio como las levaduras de P. brasiliensis eran multinucleadas (14), se quiso averiguar si las conidias también lo eran. Se incubaron suspensiones de conidias a 36º C por varias horas y se realizaron coloraciones especiales con mitramicina para la observación de núcleos, haciendo la lectura al microscopio de fluorescencia (27). Fue posible observar que las conidias eran uninucleadas al momento de comenzar el experimento. Sin embargo, 72-96 horas después de su transición a levaduras, 80% de ellas presentaban ya 4-5 núcleos (27).