Se llevó a cabo una investigación
descriptiva de corte transversal (27) la población estuvo alrededor
de 7000 mujeres que acudieron a la pesquisa de cáncer de cuello uterino entre
julio y diciembre del año 2006, en la Clínica de Prevención de Cáncer de la
Sociedad Anticancerosa del estado Aragua, Maracay, Venezuela, ubicada en el
Municipio Girardot. La muestra fue probabilística y conformada por 303 de ellas
(95% de intervalo de confianza y 2% de
error muestral) (28) a las referidas mujeres se les solicitó el
consentimiento, luego, se aplicó un cuestionario para obtener datos socio
demográficos y clínicos a fin de determinar la prevalencia y los factores de
riesgo asociados a la infección. La identificación de las levaduras se realizó
durante ese mismo año utilizando el procedimiento descrito abajo. Sin embargo,
las pruebas de sensibilidad fueron llevadas a cabo en el año 2008.; fueron
ensayadas 59 cepas de Candida spp aisladas del exudado vaginal de las
referidas mujeres con CVV, las mismas se encontraban conservadas en agua
destilada estéril con aceite mineral a temperatura ambiente, en la micoteca del
Laboratorio de Micología de la Universidad de Carabobo Sede Aragua.
Procedimiento experimental.
Las muestras vaginales fueron tomadas
de fondo de saco vaginal por el médico Gineco-Obstetra con espéculo e hisopo
estéril, fueron transportadas en refrigeración (4°C) al laboratorio para su
procesamiento. Los criterios de exclusión fueron: estar sometida a medicación
antibiótica o antimicótica en los siete días previos a la toma de la muestra y
el sangrado vaginal.
Examen Directo Cultivo e Identificación
de Levaduras.
A la secreción vaginal se le practicó
examen directo al fresco con tinta Parker y KOH 10%, y siembra por estría en
placas con agar Sabouraud cloranfenicol, se incubaron por 48h a 37°C. Se
consideró una CVV, aquellas muestras con crecimiento de 10 o más colonias de
levaduras a las 48h. Colonias identificadas mediante las pruebas de producción
de tubos germinativos en suero, producción de clamidoconidias en agar harina de
maíz, crecimiento en cicloheximida y asimilación de azucares (29),
características de crecimiento en CHROMagar Candida (Oxoid), para diferenciar C. dubliniensis se ensayaron varias pruebas: crecimiento a 42°C,
utilización de xilosa como fuente de carbono (29), medio líquido
Staib y medio liquido semilla de girasol (30). Todas las pruebas de
identificación excepto las de la última especie mencionada fueron repetidas
antes del ensayo de sensibilidad.
Determinación de la sensibilidad a
fluconazol
Como método de referencia se utilizó la
técnica de microdilución en caldo descrita en el documento M27-A2 del Clinical
and Laboratory Standards Institute
(CLSI, 2002) (31). Para la preparación del inoculo se tomaron
cada una de las cepas de Candida identificadas, las cuales fueron
cultivadas 24h en placas de agar Sabouraud, a partir de estos se realizaron
suspensiones celulares en agua destilada estéril hasta obtener la turbidez
correspondiente a el patrón 0.5 de la escala de Mc Farland, equivalente a 106 UFC/mL. De la suspensión previa se
hicieron diluciones 1:100 en el medio RPMI 1640 (con glutamina, rojo de fenol,
sin bicarbonato- Sigma-) suplementado con glucosa 2% en buffer MOPS (0.165 M)
ajustado a pH 7.0, la concentración
final del inoculo fue de 0,5-2,5 X 103, a partir de éste se dispensó 180 µL en placas de
microtitulación que previamente tenían diluciones seriadas del antifúngico de
0,5 a 128 µL, excepto en los pocillos de los extremos que fungían de control
negativo y positivo. El fluconazol fue gentilmente donado por Pfizer Inc,
Venezuela. La lectura se realizó de manera visual después de 48h de incubación
a 37°C. Considerando como Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) el pocillo sin
crecimiento microbiano visible a través de una lente de aumento.
Con la finalidad de introducir un
método alternativo, se realizó la determinación de sensibilidad a fluconazol
por la técnica de difusión en agar Müller Hinton suplementado con glucosa al 2%
y 0,5 µg/L de azul de metileno siguiendo el protocolo del documento M44-A de
CLSI (2004) (32), utilizando discos de fluconazol de 25 µM (OXOID).
Ambos ensayos se hicieron paralelamente
utilizando el mismo inoculo y por duplicado. Las cepas control fueron Candida albicans ATCC 90028, Candida glabrata ATCC90030, Candida krusei ATCC6258, Candida tropicalis CCS0849, Candida parapsilosis ATCC22019, algunas
suministradas por el Laboratorio de Micología del Instituto Nacional de Higiene
“Rafael Rangel” (INHRR).
Análisis de los Resultados
Los datos fueron
agrupados en tablas de frecuencia para mostrar el rango, la media geométrica y
promedio de las CMI, el porcentaje de cepas sensibles (S), sensibles
dependientes de la dosis (SDD) y resistentes (R), la concordancia entre los
métodos en la categorización de los resultados y los errores cometidos en la
categorización. Los errores fueron considerados de acuerdo con el documento
M27-A2 (31). 
