El presente estudio se ha realizado en 15 pacientes de sexo femenino. Utilizamos la hibridación in situ como método para detectar los diversos tipos de VPH. Aunque no conocemos referencias sobre alteraciones del examen ginecológico de las pacientes, sin embargo tenemos la información de que en ninguna de ellas se reportó positividad para el VIH. Para su estudio histológico, las lesiones anales fueron siempre examinadas diferenciando entre las que se originan en el canal anal y las que se originan en la margen anal o en la piel perianal. Los 15 casos examinados correspondieron a lesiones neoplásicas del canal anal. El canal anal se divide en tres zonas que se hallan tapizadas por distintos tipos de mucosa; la región superior es llamada zona colorectal y está recubierta por mucosa del tipo colorectal; la zona intermedia es denominada zona transicional anal (Z T A), suele extenderse unos 10 mms., por encima de la lí­nea pectí­nea y suele estar tapizada por epitelio transicional anal, pero también pueden estar presentes islotes de epitelio colorectal y escamoso. Por debajo de la lí­nea pectí­nea se halla la zona escamosa tapizada por epitelio escamoso que empieza a queratinizarse en la apertura anal y a continuación se halla la piel perianal que contiene pelos y glándulas sebáceas, ecrinas y apocrinas. Ver resultados histológicos de algunos casos en la Figura 1.

Figura 1 : 1. Cáncer del canal anal No 3: se observa el epitelio de la zona de transición H&E 200X. 2: Cáncer del canal anal No 6. Apariencia basaloide se observa coilocitosis. H&E 200X. 3: Cáncer del canal anal No 1 Un área sin infiltración con disqueratosis y coilocitosis superficial H&E 150X. 4: VPH de amplio espectro positivo en caso No 7 (WS- hibridación in situ) 400X. 5 : VPH de alto riesgo en caso No 10 (AR-hibridación in situ) 400X. 6 : VPH de alto riesgo en caso No 8 (AR-hibridación in situ) inmunomarcaje focal en núcleos basales 800X

Estudiamos la presencia de infección con el virus del papiloma humano (VPH) en 11 de los 15 casos de mujeres con diagnóstico histológico de cáncer del canal anal. El VPH fue examinado por hibridación in situ demostró en todos los casos ser positivo para virus de amplio espectro (WS) y para virus de alto riesgo (AR). Le dimos especial atención a las caracterí­sticas del marcaje observado entre las dos sondas especí­ficas WS y AR (DAKO), de modo que las señales de la Biotina se demostraron con el complejo primario de estreptavidina-peroxidasa,tiamina-biotinilada y secundariamente estreptavidina-peroxidasa. En todos los casos, la presencia de VPH-AR, se examinaron nuevamente para la detección de VPH 16, 18 y 31-33. La distribución del marcaje en las células de los distintos estratos del epitelio se examinó atendiéndole a la apariencia histológica, el grado de la neoplasia intraepitelial anal (NIA) presente y a las caracterí­sticas invasivas de los carcinomas. Los casos examinados para VPH de Amplio espectro (WS) y de Alto riesgo (AR) resultaron todos positivos para ambas sondas. Se examinaron los virus 16, 18 y 31-33, en casos seleccionados (1, 3, 4, 6, 9 y 11) y todos mostraron positividad para VPH 16 y para VPH 31-33. Dos casos (1 y 9) mostraron solamente VPH 18. En uno de los casos de carcinoma (caso 11) se observó presencia de inmunomarcaje para ambos virus 16 y 18. Ver Figura 1 (4, 5 y 6)

Las seis biopsias seleccionadas estudiadas simultáneamente con hibridación in situ cromogénica para VPH y con Hibridación Genómica Comparada con sondas centroméricas para varios cromosomas, correspondieron a los casos 3, 4, 5, 6, 7,y 10. En los casos 3 y 6 no se obtuvieron resultados satisfactorios por problemas técnicos. Se examinaron 4 casos ( 4, 5, 7, y 10) con resultados satisfactorios, utilizando las sondas para los cromosomas 3, 17 y 18. Se detectaron aneuploidí­as en todos los casos, siendo más evidentes para los cromosomas 3 y 17. y menos frecuentes en el cromosoma 18. Ver Figuras 2, 3 y 4.

Fig 3 : Monosomí­as y tetrasomí­as del cromosoma 18

Figura 4 : Trisomí­as, monosomí­as y nulisomí­as del cromosoma 3