Virología
Fiebres hemorrágicas por Hantavirus en Venezuela
Toma, conservación y transporte de las muestras
Toma, conservación y transporte de las muestras
para el diagnóstico de laboratorio de las Fiebres Hemorrágicas
por Hantavirus
Las muestras deben ser tomadas bajo estrictas medidas de esterilidad y bioseguridad.
Pueden ser conservadas hasta por 24 horas a –4ºC y enviadas inmediatamente
al laboratorio de aislamiento viral del Instituto Nacional de Higiene “Rafael
Rangel” (INHRR) o al Centro de Investigaciones de Virosis Hemorrágicas
y Enfermedades Transmisibles (CIVIHET). En caso de almacenamiento, conservarlas
a –80ºC, es decir, ultrabaja temperatura o en nitrógeno líquido,
hasta su posterior envío y procesamiento.
Ya que es necesaria la implementación de medidas de bioseguridad y esterilidad
de las muestras biológicas recolectadas para los estudios de laboratorio,
se recomienda la utilización de crioviales para efectos de almacenamiento
y transporte (envío) de las muestras. El empleo de guantes, tapabocas,
tubos y camisas Vacutainer es muy importante. En el caso de pacientes con diagnóstico
clínico probable de FHV, pacientes ingresados en la UCI y fallecidos,
es indispensable el uso de equipos de protección de alta seguridad.
En el caso de muestras serológicas para estudios de aislamiento viral,
es recomendable que el volumen de suero sea suficiente para la realización
de todos los estudios virales, y debe ser dispensado en el criovial hasta que
sólo ocupe la marca indicada en el mismo, ya que cuando se congela el
líquido, el sólido formado ocupa mayor espacio, lo cual implica
un alto riesgo biológico, pues el criovial puede romperse o explotar.
El envío debe hacerse en recipientes especiales según los patrones
establecidos para el transporte de muestras biológicas de alto riesgo
infeccioso.
En caso de pacientes fallecidos, debe realizarse la autopsia. Se toman pequeños
fragmentos de tejido (pulmón, hígado, bazo), se colocan en viales
individuales sin agregarle formol ni solución salina, se rotulan con
la identificación del paciente y se envían inmediatamente las
muestras refrigeradas a Epidemiología o a la Coordinación de Estudios
de Fiebre Hemorrágica Venezolana. Si se envían directamente al
Instituto Nacional de Higiene, hacerlo en suficiente hielo seco (34, 35).
Diagnóstico
de laboratorio de las Fiebres Hemorrágicas por Hantavirus.
Aislamiento viral
El diagnóstico etiológico específico para los Hantavirus
puede hacerse mediante el aislamiento e identificación del agente viral
a partir de muestras serológicas tomadas durante la fase aguda de la
enfermedad, es decir, de 3 a 7 días del inicio del cuadro clínico
o a partir de sangre y tejidos en los casos fatales. La utilización de
líneas celulares, tales como células Vero E-6 y posterior aplicación
de la técnica de Inmunofluorescencia Indirecta (IFI), empleando anticuerpos
policlonales específicos contra los Hantavirus, tanto de la Fiebre Hemorrágica
con Síndrome Renal (FRS) como del Síndrome Pulmonar (HSP), permite
confirmar el diagnóstico (3, 36, 37).
RT-PCR
Mediante la amplificación parcial del ARN viral por la técnica
de reacción en cadena de la polimerasa, utilizando transcriptasa reversa
(RT-PCR) y utilizando primers genéricos y específicos para Hantavirus,
se puede lograr un diagnóstico confirmatorio (38-41).
Serología
También se usa la detección de anticuerpos clase específicos
tipo Ig M e Ig G en muestras de suero recolectadas en la fase aguda tardía
y fase convalesciente de la enfermedad, es decir, a los 15 y 30 días,
utilizando la técnica de IFI cuantitativa o el ensayo inmunoenzimático
ELISA, para la detección de anticuerpos clase específicos tipo
Ig M e Ig G (3, 36, 37). |
