Material vegetal

El material vegetal (hojas frescas) fueron obtenidas o recolectadas de tierras destinadas a la agricultura de yucas ubicadas en el sector “Fundo Coropo” del municipio “Francisco Linares Alcántara”, estado Aragua.

Extracción

Para la obtención del extracto acuoso se procedió a pesar 5 g de material vegetal, colocándolos en un vaso precipitado de 400 mL con 200 mL de agua destilada a 100 °C durante 8 minutos,  dejándolo en reposo por 24 horas. Por último, se procedió a filtrado empleando papel de filtro Whatman número 4 (7).

Para el extracto metanólico se pesaron 5 gramos de muestras, colocándolas en un vaso precipitado de 400 mL con 200 mL de metanol al 70 % (v/v). La muestra se dejó macerando durante 24 horas con agitación a 150 rpm a una temperatura de 25 °C. El filtrado se realizó a través de papel de filtro Whatman número 4 y el exceso del solvente utilizado se evaporó a presión reducida utilizando un rota evaporadora (7).

Cuantificación de compuestos fenólicos totales (polifenoles)

La determinación de fenoles se realizó por el método colorimétrico de Folin-Ciocalteu. A 50 µL de muestra fueron adicionados a 125 µL del reactivo de Folin, y 400 µL de carbonato de Sodio 7,1 % (p/v), completándose con agua destilada hasta 1000 µL. Seguidamente se prepararon 5 patrones de concentración de 50, 100,150, 200 y 250 µg/mL, a partir de una solución patrón madre de Ácido Gálico (fenol) de concentración 500 µg/mL. Por último, realizó la lectura a 760 nm empleando el equipo de absorción molecular Génesis 20 (Thermo Scintific), y expresando los resultados como equivalente a ácido gálico (EAG)/g material vegetal (MV) (9).

Determinación de flavonoides

La determinación de flavonoides se realizó siguiendo el siguiente protocolo: 100 µL de muestra fueron mezclados con 30 µL de NaNO₂ al 5 % (p/v), 30 µL de AlCl₃ 10 % (p/v), 200 µL de NaOH a 1M y ajustados con agua destilada hasta un volumen final de 1000 µL, se realizó la lectura espectrofotométrica a 510 nm y se comparó con la curva patrón usando como estándar (+) catequina. Los resultados fueron expresados como mg de Catequina Equivalente (CE) / g de material vegetal (MV) (10).

Método del radical libre 2,2-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH)

Para evaluar la actividad antioxidante se usó el método del radical libre 2,2-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH) (Sigma Aldrich Co®) con una solución 100 µM de DPPH en metanol al 80 %, la cual permite observar una disminución de la absorbancia, debido a la cesión de un átomo de hidrógeno por parte de los compuestos antioxidantes presentes en los extractos. En una cubeta de vidrio se colocaron 100 µL de extracto y 2,9 mL de DPPH. La absorbancia se monitoreó cada 5 minutos por 30 minutos a una longitud de onda de 515 nm. La absorbancia de referencia (A₀) fue obtenida al sustituir el volumen de extracto por metanol al 80 %. El porcentaje de reducción de DPPH se obtuvo de la expresión: DPPH (%)= (A₀-A_n) 100 / A₀, donde A₀ y A_n fueron las absorbancias de referencia y de la muestra, respectivamente (11).

Determinación de la capacidad antioxidante por el ensayo del poder reductor férrico (FRAP)

Análisis estadístico.

Todas las determinaciones se realizaron por quintuplicados y se expresaron los valores como los promedios ± desviación estándar (DE). Para la comparación de la concentración tanto de fenoles totales, flavonoides y actividad antioxidante se aplicó un análisis de varianza de dos vías con interacción (ANOVA), usando el programa Statistix 9.0 para Windows.